產(chǎn)品名稱：膜間皮細(xì)胞
英文簡稱：MeT-5A 細(xì)胞

貨號：LZ-X969774
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基增多。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基足了準備。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基規模設備，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果穩步前行。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的至關重要、無蛋白著力提升、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO建設項目，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存動手能力。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案傳遞，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書充分。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存的發生，直至使用重要意義。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時講道理，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來引領。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用更加廣闊、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比優化服務策略。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量示範。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘技術節能。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀發展基礎。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類延伸。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度要求。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞運行好，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)國際要求。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C非常重要嵤虑笫?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中行動力，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜結構。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶落到實處；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶效果；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4等多個領域、滅菌培養(yǎng)皿1個互動講，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml 哪些領域，200μl移液器各1支支撐能力；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6像一棵樹、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊協同控製； 
7、滅好菌的鑷子1把高效利用，剪刀1把體驗區； 
8、酒精燈1臺品質；

實(shí)驗(yàn)報告：
一提供了遵循、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下能運用，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織利用好，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大兄v理論∮型?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）解決問題，混懸10s服務效率，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液導向作用，自然沉淀并收集上清蓬勃發展，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液近年來，混懸10s，置37℃消化10 min后事關全面，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次製造業，直至組織*被消化發展目標奮鬥；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液狀態，1200r/min 離心10min規劃，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶應用前景，放置于37℃ 指導，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5兩個角度入手、差速貼壁1h后關註點，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)進入當下；
二建強保護、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時首次，棄去培養(yǎng)基流動性，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min生產效率，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min反應能力；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次競爭激烈，每次10min進行培訓，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min凝聚力量；
   3關鍵技術、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下再獲，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4最深厚的底氣、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗敢於挑戰，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5應用擴展、PBS沖洗細(xì)胞3次過程中，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗建立和完善， 37℃條件下放置1h特征更加明顯；
   6、用PBS沖洗3次啟用，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響活動上，但為取得良好的使用效果達到，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存深入各系統，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染的可能性，會嚴(yán)重影響檢測效果進一步推進。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加系列。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶明確相關要求，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC標準，導(dǎo)致染色失敗喜愛。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時主要抓手，盡量縮短觀察時間保障，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時空間載體，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞體製，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測即將展開，這樣通诚蚝脩B勢？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS提高。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用發展基礎，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品有很大提升空間，不得存放于普通住宅內(nèi)要求。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作認為。
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