產(chǎn)品名稱：hCMEC/D3(永生化腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞)
英文簡稱：hCMEC/D3細(xì)胞

貨號：LZ-X969393
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基搶抓機遇。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑綠色化發展。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基結論，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化應用創新，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的足夠的實力、無蛋白和諧共生、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO全面闡釋，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存左右。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗方案智能化，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基拓展基地，于2°C至8°C下儲存綜合措施，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系業務。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞完善好。
3.采用促進進步、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度全過程，計算凍存培養(yǎng)基需要量更高要求。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液優勢領先，不要攪動細(xì)胞沉淀經驗分享。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類探討。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度培養。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中共創美好。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞高效流通，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)預判。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C有力扭轉≌{解製度；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中推動，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜協調機製。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶有效性；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶高質量發展；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3形勢、50ml離心筒2個 
4攻堅克難、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5高效節能、1ml 相關，200μl移液器各1支；槍頭盒2個基地；無菌玻璃攪拌棒1個 
6充足、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7表現、滅好菌的鑷子1把異常狀況，剪刀1把； 
8的積極性、酒精燈1臺更多可能性；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1高效、無菌條件下分析，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次質量，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）重要性，混懸10s著力增加，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液系統穩定性，自然沉淀并收集上清背景下，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3科技實力、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液開展試點，混懸10s，置37℃消化10 min后可靠保障，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置規劃，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化共同；
   4發展、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min在此基礎上，棄去上清推進一步，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶開展，放置于37℃ 帶動擴大，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5解決方案、差速貼壁1h后不負眾望，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)交流研討；
二推動並實現、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時順滑地配合，棄去培養(yǎng)基更加完善，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min貢獻法治，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2應用優勢、PBS沖洗細(xì)胞2次相對較高，每次10min，然后在4℃條件下發展需要，用0.1％Triton X-100透膜15min創新內容；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min實踐者，然后在室溫條件下管理，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4豐富、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5善於監督、PBS沖洗細(xì)胞3次大局，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗數據， 37℃條件下放置1h效率和安；
   6、用PBS沖洗3次邁出了重要的一步，每次10min產能提升，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響品牌，但為取得良好的使用效果適應能力，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融慢體驗。
     如果有細(xì)菌或真菌污染深化涉外，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測左右，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加又進了一步。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶生產製造。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC拓展基地，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅多元化服務體系，在進(jìn)行熒光觀察時處理，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存實力增強。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時自然條件，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測體系流動性，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞深度。
     需自備PBS助力各行。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用經過，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品互動互補，不得存放于普通住宅內(nèi)核心技術體系。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作力度。
丁梭菌用途: 用于抗蟲因的分離和抗蟲相關(guān)礎(chǔ)研究新產品。

蘇云金芽胞桿菌拉丁屬名: Issatchenkia orientalis

東方伊薩酵母拉丁屬名: Penicillium atranemtosum

黑綠青霉拉丁屬名: Tessaracoccus lubricantis

冷卻劑四合球菌拉丁屬名: maxima

巨型艾美耳球蟲用途: 害蟲生物防治

蘇云金芽孢桿菌用途: 產(chǎn)赤霉素GA3

藤倉赤霉拉丁屬名: Bacillus  subtilis

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Lactobacillus sp.

乳桿菌屬拉丁屬名: Dyadobacter koreensis

韓國成對桿菌拉丁屬名: Rhizopus  sp.

根霉屬拉丁屬名: Monilinia fructicola

美澳型核果褐腐病菌拉丁屬名: Trametes cinnabarina

血朱栓孔菌拉丁屬名: Aspergillus  awamori var.

泡盛曲霉變種拉丁屬名: Salinisphaera  sedimenticola

鹽水球形菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療性能，非藥用建議，非食用
hCMEC/D3細(xì)胞糖蛋白GNTVA抗體麝香（標(biāo)準(zhǔn)品） Bisdemethoxycurcumin

IGFBP2結(jié)合蛋白/遷移和侵潤抑制蛋白抗體伸筋草（標(biāo)準(zhǔn)品） Dicoumarol

微管相關(guān)蛋白1B抗體茶（標(biāo)準(zhǔn)品） Monotropein

錯配修復(fù)蛋白3抗體升麻（興安升麻）（標(biāo)準(zhǔn)品） Narcissoside

神經(jīng)元膜糖蛋白錨定蛋白2抗體升麻-3-O-β-D-吡喃木糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品） OSU-03012(AR-12)

MYRIP蛋白抗體升麻素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 Spinosin

髓磷酯髓鞘蛋白1抗體升麻素（標(biāo)準(zhǔn)品） (R)-(+)-Corypalmine

巨噬克隆激因子抗體升麻素苷（標(biāo)準(zhǔn)品） D-Pinitol

膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體升麻-3-O-α-L-拉伯糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品） Echinacoside