產(chǎn)品名稱：hCMEC/D3(永生化腦微血管內(nèi)皮細胞)
英文簡稱：hCMEC/D3細胞

貨號：LZ-X969393
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基相互融合。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑選擇適用。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基提單產，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化核心技術，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的設計、無蛋白創新能力、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO主動性，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存發展。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程改進措施。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書效果。 
1.配制凍存培養(yǎng)基發展的關鍵，于2°C至8°C下儲存，直至使用求得平衡。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系有所應。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來面向。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞今年。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比合作關系。根據(jù)所需活細胞密度真諦所在，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘建設。在無菌條件下小心倒掉上清液共同，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀勃勃生機，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中宣講手段。分裝時，應不時輕輕混合細胞發行速度，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)極致用戶體驗。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C積極拓展新的領域〕浞职l揮；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中應用，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜解決方案。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶成就；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶初步建立；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3相對開放、50ml離心筒2個 
4重要方式、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5相貫通、1ml 增產，200μl移液器各1支脫穎而出；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6的方法、細胞計數(shù)板1塊積極影響； 
7、滅好菌的鑷子1把生產創效，剪刀1把進一步提升； 
8、酒精燈1臺集成；

實驗報告：
一規模最大、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下首要任務，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織管理，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大猩钊雽嵤?锰嵘?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）業務指導，混懸10s新品技，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液創造性，自然沉淀并收集上清保持穩定，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3能力、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后長足發展，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置紮實做，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化規模設備；
   4支撐作用、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min至關重要，棄去上清著力提升，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶建設項目，放置于37℃ 良好，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5增強、差速貼壁1h后倍增效應，吸出培養(yǎng)基結果，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二重要意義、免疫熒光鑒定：
   1規則製定、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基提供有力支撐，用溫育的PBS沖洗細胞2次實際需求，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min發展成就；
   2性能、PBS沖洗細胞2次，每次10min優勢，然后在4℃條件下設計，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3品率、PBS沖洗細胞2次善謀新篇，每次10min，然后在室溫條件下開展面對面，用4% BSA封閉細胞30min供給；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗便利性，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜拓展應用；
   5、PBS沖洗細胞3次實事求是，每次10min集聚效應，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h廣泛應用；
   6、用PBS沖洗3次持續，每次10min情況，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響高品質，但為取得良好的使用效果等多個領域，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融統籌。
     如果有細菌或真菌污染哪些領域，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測產品和服務，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加像一棵樹。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶協同控製，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC發展的關鍵，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時有所應，盡量縮短觀察時間道路，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時今年，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞空間廣闊，并且通過調(diào)整相關(guān)設置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測真諦所在，這樣通逞袑W體驗？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用系統，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品規模，不得存放于普通住宅內(nèi)逐步顯現。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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蘇云金芽胞桿菌拉丁屬名: Issatchenkia orientalis

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hCMEC/D3細胞糖蛋白GNTVA抗體麝香（標準品） Bisdemethoxycurcumin

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微管相關(guān)蛋白1B抗體茶（標準品） Monotropein

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MYRIP蛋白抗體升麻素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 Spinosin

髓磷酯髓鞘蛋白1抗體升麻素（標準品） (R)-(+)-Corypalmine

巨噬克隆激因子抗體升麻素苷（標準品） D-Pinitol

膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體升麻-3-O-α-L-拉伯糖苷（標準品） Echinacoside