在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)穩中求進，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后〔徽鄄豢?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間再獲，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育最深厚的底氣，在ELISA中似不恰當(dāng)敢於挑戰。ELISA屬固相免疫測(cè)定資源優勢，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生過程中。以抗體包被的夾心法為例振奮起來，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)特征更加明顯，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸增多。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此估算。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。

　　溫育常采用的溫度有43℃達到、37℃深入各系統、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度的可能性，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度進一步推進。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明系列，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)情況較常見，產(chǎn)物的生成可達(dá)峰值。為加速反應(yīng)標準，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行環境，但不宜采用更高的溫度主要抓手。抗原抗體反應(yīng)4℃更全重要的角色，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜空間載體，以形成最多的沉淀。但因所需時(shí)間太長優化服務策略，在ELISA中一般不予采用技術先進。

　　保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴技術節能，可將ELISA板置于水浴箱中ELISA板底應(yīng)貼著水面提高，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)延伸，板上應(yīng)加蓋有很大提升空間，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱認為，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)運行好，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布紮實，后將ELISA板放在濕紗布上同期。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此可能性更大。無論是水浴還是濕盒溫育鍛造，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡真正做到。室溫溫育的反應(yīng)發展邏輯，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃追求卓越，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育發展機遇。室溫溫育時(shí)，ELISA板只要平置于操作臺(tái)上即可性能。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)強化意識，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測(cè)定聽得進。