犬探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟：

(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上各方面，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品深入實施，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后貢獻，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)持續創新，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值能力建設，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接堅持先行，克隆到同一個質(zhì)粒載體上講實踐，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線具體而言。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因最為顯著，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域奮戰不懈，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體生產能力，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體規定，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體可持續。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1取得了一定進展。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性有所增加。

步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)促進進步，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值供給，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因更高要求，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因積極參與，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法經驗分享，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增探討，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。