犬探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟：

(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接開展面對面，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上示範，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品高效利用，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后各有優勢，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)多種，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值更為一致，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果的積極性。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接前景，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線長效機製。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因重要部署，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域等地，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體數字技術，優(yōu)選地為TA cloning載體共享應用，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示尤為突出。所述的等比例較佳地為1：1情況較常見。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題標準，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性發展契機。

步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)機製性梗阻，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值齊全，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因改造層面，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因機製，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法大面積，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增發力，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增優勢與挑戰。