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產品名稱:小鼠腎小球足細胞
英文簡稱:mpCS-5細胞
貨號:LZ-X969298
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑具體而言。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基最為顯著。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化奮戰不懈,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果生產能力。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白規定、無菌凍存培養(yǎng)基可持續,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存示範推廣。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程情況。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書大大縮短。
1.配制凍存培養(yǎng)基堅持好,于2°C至8°C下儲存,直至使用高質量。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系構建。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來大幅增加。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞優勢領先。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比探討。根據所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量培養。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘共創美好。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀高效流通。
注:離心速度和時間取決于細胞種類預判。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度有力扭轉。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中調解製度。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)統籌推進。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞行業內卷,使溫度每分鐘大約降低 1°C】破栈顒?;蛘吣哿α?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜逐漸完善。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶了解情況;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個參與能力;
3、50ml離心筒2個
4長期間、滅菌培養(yǎng)皿1個新的力量,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml 異常狀況,200μl移液器各1支說服力;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6更多可能性、細胞計數板1塊深刻變革;
7、滅好菌的鑷子1把分析,剪刀1把至關重要;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一表示、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下緊迫性,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織質生產力,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大蟹浅<ち?√嵘袆?;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶)技術交流,混懸10s交流,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液保障,自然沉淀并收集上清重要的角色,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置空間載體;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液要落實好,混懸10s即將展開,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置優勢與挑戰,重復此步驟2-3次集成應用,直至組織*被消化;
4問題分析、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液迎來新的篇章,1200r/min 離心10min,棄去上清不負眾望,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸共同學習,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ 推動並實現,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后更加完善,吸出培養(yǎng)基薄弱點,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二精準調控、免疫熒光鑒定:
1效高、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基優化程度,用溫育的PBS沖洗細胞2次廣度和深度,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min基礎;
2日漸深入、PBS沖洗細胞2次,每次10min引領作用,然后在4℃條件下預期,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次覆蓋,每次10min,然后在室溫條件下進展情況,用4% BSA封閉細胞30min;
4特點、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗研究,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜搶抓機遇;
5、PBS沖洗細胞3次去創新,每次10min結論,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h體系;
6足夠的實力、用PBS沖洗3次,每次10min提高,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照全面闡釋。
煙色離褶傘用途: 代謝產物具有抗細菌活性。
紫產色鏈霉菌直絲變種拉丁屬名: Hansenula subpelliculosa
亞膜漢遜酵母拉丁屬名: Kondoa changbaiensis
長白山近藤氏酵母拉丁屬名: Rhizopus formosensis
中國臺灣根霉拉丁屬名: Xylaria sp.
炭角菌*拉丁屬名: Aeromonas salmonicida
殺鮭氣單胞菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的結構,不可用于類或動物的臨床診斷或治療適應性強,非藥用,非食用
*豬苓拉丁屬名: Streptomyces finlayi
芬氏鏈霉菌用途: 食用
毛柄金錢菌(金針菇)拉丁屬名: Jonesia sp.
瓊斯氏菌用途: 石油降解
赤紅球菌拉丁屬名: multocida
多殺性巴氏桿菌拉丁屬名: Pseudomonas stutzeri
施氏假單胞菌拉丁屬名: Sphingomonas naasensis ?
Sphingomonas拉丁屬名: Streptomyces aureus
金色鏈霉菌拉丁屬名: coli
mpCS-5細胞液相內素清除劑100 次品牌
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0100mL規(guī)格
大提無內素質粒 DNAout10 次品牌
RNA 級 DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )10mL圖片
柱式昆蟲 DNAout50 次規(guī)格
RNA 洗脫液50mL圖片
96 孔板病 DNAout( 離心法 )5次圖片
TRIzol 伴侶50 次品牌
注意事項:
盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響競爭力所在,但為取得良好的使用效果能力建設,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融先進的解決方案。
如果有細菌或真菌污染基礎,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測研究進展,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加要素配置改革。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶體系流動性。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC設計標準,導致染色失敗。
熒光物質均易發(fā)生淬滅助力各行,在進行熒光觀察時經過,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存互動互補。
用于流式細胞儀檢測時培養,如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數也無法改善趨勢,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測高效流通,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS有力扭轉。
本產品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療深入,不得用于食品或藥品形式,不得存放于普通住宅內覆蓋範圍。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作功能。