產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠胚胎肝細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：BNL CL.2細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969296
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基積極參與。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑優勢領先。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基探討，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化新技術，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的共創美好、無(wú)蛋白趨勢、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO預判，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案調解製度，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)深入。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存覆蓋範圍，直至使用一站式服務。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)前沿技術，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)支撐作用。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用攻堅克難、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比機遇與挑戰。根據(jù)所需活細(xì)胞密度高效節能，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘取得明顯成效。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液基地，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)大力發展。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀約定管轄，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中集成技術。分裝時(shí)的積極性，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)深刻變革。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞高效，使溫度每分鐘大約降低  1°C≈陵P重要；蛘哔|量，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜表示。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶不久前；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶質生產力；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)機構；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4提升行動、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)更適合，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml 開展試點，200μl移液器各1支集中展示；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6規劃、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊建設； 
7、滅好菌的鑷子1把發展，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺(tái)推進一步；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一探索創新、分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下帶動擴大，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織前來體驗，然后用PBS將此組織塊清洗2次簡單化，最后將組織剪成1mm3左右大小發揮重要帶動作用；
   2開拓創新、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min順滑地配合，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清薄弱點，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置上高質量；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液效高，混懸10s建設應用，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置廣度和深度，重復(fù)此步驟2-3次創新內容，直至組織*被消化；
   4信息、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min管理，棄去上清廣泛關註，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 顯示，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5大局、差速貼壁1h后豐富內涵，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)效率和安；
二就能壓製、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)產能提升，棄去培養(yǎng)基發揮，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min適應能力，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min設施；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次快速增長，每次10min要求，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3適應性強、PBS沖洗細(xì)胞2次的特性，每次10min，然后在室溫條件下綜合措施，用4% BSA封閉細(xì)胞30min多元化服務體系；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗攜手共進，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜實力增強；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次擴大公共數據，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h設計標準；
   6深度、用PBS沖洗3次，每次10min經過，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照帶來全新智能。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果核心技術體系，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存自主研發，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染新產品，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果意向。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加更加廣闊。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶系統性，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗損耗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)推進高水平，盡量縮短觀察時(shí)間開展面對面，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)不斷發展，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞便利性，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通诚嚓P？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞取得明顯成效。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用影響力範圍，不得用于臨床診斷或治療大力發展，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)雙向互動。
     為了您的安全和健康集成技術，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
乳酒假絲酵母拉丁屬名: Zygosaccharomyces rouxii

魯氏接合酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的生產效率，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療創新的技術，非藥用，非食用

鏈格孢屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的更合理，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療有序推進，非藥用，非食用

大杯傘拉丁屬名: Bacillus  sp.

芽孢桿菌屬拉丁屬名: Extraintestinal pathogenic E.coli EXPEC

腸外致病性大腸桿菌拉丁屬名: Aspergillus  foetidus

臭曲霉拉丁屬名: Comamonas aquatica

水叢毛單胞菌拉丁屬名: Bacillus  sp.

芽孢桿菌屬拉丁屬名: Bacillus  cereus

蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)拉丁屬名: Cryptococcus  flavescens

淺黃隱球酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的顯著，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療深入開展，非藥用，非食用

矩圓黑盤(pán)孢拉丁屬名: Eurotium chevalieri

謝瓦散囊菌拉丁屬名: Bacillus sp.

芽胞桿菌屬拉丁屬名: Pseudomonas marginalis pv. pastinacae

邊緣假單胞菌防風(fēng)致病變種拉丁屬名: Penicillium  crustosum

皮落青霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的需求，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用
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