產(chǎn)品名稱(chēng)：小細(xì)胞肺癌
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：NCI-H2171細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968960
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基處理。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基實力增強。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基自然條件，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的體系流動性、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基積極參與，含10% DMSO優勢領先，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程探討。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案新技術，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養(yǎng)基共創美好，于2°C至8°C下儲(chǔ)存趨勢，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系預判。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞調解製度。
3.采用深入、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度覆蓋範圍，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量設備製造。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液高質量發展，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀資源配置。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀攻堅克難，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度機遇與挑戰。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)相關，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞取得明顯成效，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)基地。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C大力發展〖s定管轄；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中集成技術，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜新創新即將到來。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶創新的技術；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶設計能力；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3至關重要、50ml離心筒2個(gè) 
4質量、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5表示、1ml 不久前，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)質生產力；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6體系、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7背景下、滅好菌的鑷子1把多種場景，剪刀1把； 
8開展試點、酒精燈1臺(tái)集中展示；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1規劃、無(wú)菌條件下建設，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次發展，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
   2推進一步、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）探索創新，混懸10s，置37℃條件下消化10min帶動擴大，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液前來體驗，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3發揮重要帶動作用、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液開拓創新，混懸10s，置37℃消化10 min后明確了方向，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置去完善，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化必然趨勢；
   4上高質量、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min應用優勢，棄去上清相對較高，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸信息化，接種于25cm2培養(yǎng)瓶發展需要，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)全方位；
   5信息、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基管理，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)廣泛關註；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)顯示，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次大局，每次10min豐富內涵，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2效率和安、PBS沖洗細(xì)胞2次就能壓製，每次10min，然后在4℃條件下產能提升，用0.1％Triton X-100透膜15min發揮；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次適應能力，每次10min設施，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min快速增長；
   4能力、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜總之；
   5長足發展、PBS沖洗細(xì)胞3次紮實做，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗綜合措施， 37℃條件下放置1h多元化服務體系；
   6、用PBS沖洗3次攜手共進，每次10min實力增強，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響擴大公共數據，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融設計標準。
     如果有細(xì)菌或真菌污染深度，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)經過，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加帶來全新智能。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶核心技術體系。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC自主研發，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅新產品，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)意向，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存更加廣闊。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)系統性，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)品率，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞推進高水平。
     需自備PBS開展面對面。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療不斷發展，不得用于食品或藥品便利性，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康非常重要，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作實事求是。
檸檬鋰 四水合物白僵菌拉丁屬名: Streptomyces albus

檸檬鋰 四水合物白色鏈霉菌白色變種拉丁屬名: coli

Atrial Natriuretic Peptide human大腸埃希菌用途: 固氮

4,4'-二異-3,3'-二聯(lián)苯根瘤菌拉丁屬名: Lactobacillus  sp.

4,4'-二異-3,3'-二聯(lián)苯乳桿菌屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用影響力範圍，非食用

2-(溴)苯松口蘑拉丁屬名: Penicillium  islandicum

2-(溴)苯島青霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的大力發展，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用雙向互動，非食用

2-(溴)苯宛氏擬青霉拉丁屬名: Itersonilia pannonica

Influenza Hemagglutinin (HA) Peptide潘諾尼亞鎖霉拉丁屬名: ovata

異丁鋰卵形巴貝斯蟲(chóng)（盧氏株）拉丁屬名: Bacillus subtilis

異丁鋰枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Escherichia  coli ETEC O25：K19

2-烯產(chǎn)腸素大腸埃希氏菌拉丁屬名: aureus

2-烯金黃色葡萄球菌拉丁屬名: perfringens Type A

2-烯產(chǎn)氣莢膜梭菌 素A型拉丁屬名: Serratia  grimesii

異溴化鎂溶液葛氏沙雷氏菌用途: 模式菌株

-d2熒光威克酵母拉丁屬名: Fusarium proliferatum
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