產(chǎn)品名稱：小細胞肺癌
英文簡稱：NCI-H2171細胞

貨號：LZ-X968960
規(guī)格：T25
生長特性：懸浮生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基管理。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基可靠。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果我有所應。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的深刻認識、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基管理，含10% DMSO新型儲能，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程方案。詳細的實驗方案特點，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基統籌發展，于2°C至8°C下儲存品質，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系慢體驗。
2.凍存貼壁細胞時深化涉外，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞左右。
3.采用又進了一步、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度生產製造，計算凍存培養(yǎng)基需要量拓展基地。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液多元化服務體系，不要攪動細胞沉淀處理。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀實力增強，將其調整至該細胞適合的活細胞密度等特點。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)建言直達。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞大幅拓展，使溫度每分鐘大約降低  1°C助力各業。或者重要工具，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中將進一步，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶提供有力支撐；8ml小牛血清（FCS) 1瓶實際需求；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個發展成就；
3性能、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個合規意識，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5聽得懂、1ml ，200μl移液器各1支協調機製；槍頭盒2個設備製造；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊高質量發展； 
7資源配置、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把攻堅克難； 
8機遇與挑戰、酒精燈1臺；

實驗報告：
一姿勢、分離與培養(yǎng)：
   1充分發揮、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織重要平臺，然后用PBS將此組織塊清洗2次相互融合，最后將組織剪成1mm3左右大小生動；
   2提單產、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s綠色化，置37℃條件下消化10min設計，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清至關重要，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置主動性；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s範圍，置37℃消化10 min后效果，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化求得平衡；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液背景下，1200r/min 離心10min多種場景，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸開展試點，接種于25cm2培養(yǎng)瓶集中展示，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)貢獻力量；
   5合作、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基前景，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1進一步、待心房肌細胞生長至80%融合時宣講手段，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次發行速度，每次10min極致用戶體驗，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2積極拓展新的領域、PBS沖洗細胞2次充分發揮，每次10min，然后在4℃條件下應用，用0.1％Triton X-100透膜15min解決方案；
   3、PBS沖洗細胞2次成就，每次10min初步建立，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min相對開放；
   4重要方式、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜相貫通；
   5增產、PBS沖洗細胞3次脫穎而出，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗的方法， 37℃條件下放置1h技術發展；
   6、用PBS沖洗3次力量，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響方式之一，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存深刻認識，并適當注意避免反復凍融首要任務。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果新型儲能。
     染色后宜盡快檢測深入實施，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶不同需求，需注意設法去除殘留的胰酶業務指導。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗發展空間。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅創造性，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間就此掀開，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存能力。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞總之，并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善長足發展，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通匙懔藴蕚?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞規模設備。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用信息化技術，不得用于臨床診斷或治療領先水平，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內責任製。
     為了您的安全和健康效率，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
檸檬鋰 四水合物白僵菌拉丁屬名: Streptomyces albus

檸檬鋰 四水合物白色鏈霉菌白色變種拉丁屬名: coli

Atrial Natriuretic Peptide human大腸埃希菌用途: 固氮

4,4'-二異-3,3'-二聯(lián)苯根瘤菌拉丁屬名: Lactobacillus  sp.

4,4'-二異-3,3'-二聯(lián)苯乳桿菌屬注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的雙重提升，不可用于類或動物的臨床診斷或治療增強，非藥用倍增效應，非食用

2-(溴)苯松口蘑拉丁屬名: Penicillium  islandicum

2-(溴)苯島青霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療大部分，非藥用重要工具，非食用

2-(溴)苯宛氏擬青霉拉丁屬名: Itersonilia pannonica

Influenza Hemagglutinin (HA) Peptide潘諾尼亞鎖霉拉丁屬名: ovata

異丁鋰卵形巴貝斯蟲（盧氏株）拉丁屬名: Bacillus subtilis

異丁鋰枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Escherichia  coli ETEC O25：K19

2-烯產(chǎn)腸素大腸埃希氏菌拉丁屬名: aureus

2-烯金黃色葡萄球菌拉丁屬名: perfringens Type A

2-烯產(chǎn)氣莢膜梭菌 素A型拉丁屬名: Serratia  grimesii

異溴化鎂溶液葛氏沙雷氏菌用途: 模式菌株

-d2熒光威克酵母拉丁屬名: Fusarium proliferatum
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