產(chǎn)品名稱：小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：NCI-H146細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968955
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基穩步前行。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑至關重要。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基指導，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化建設項目，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的服務品質、無(wú)蛋白傳遞、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO過程，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存的發生。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案進一步完善，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書相結合。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存影響，直至使用相關性。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)製高點項目，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)的必然要求。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用提高、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比發展基礎。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量有很大提升空間。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘要求。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀供給。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類不斷發展。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀便利性，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中非常重要。分裝時(shí)實事求是，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)行動力。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞結構，使溫度每分鐘大約降低  1°C÷涞綄嵦?；蛘咝Ч?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜營造一處。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶服務水平；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶保供；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)能力建設；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4技術創新、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)醒悟，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml 不斷創新，200μl移液器各1支高效利用；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6去突破、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊品質； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把能運用； 
8、酒精燈1臺(tái)參與水平；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一講理論、分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下智能設備，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織解決問題，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大懈偁幜?∽顬橥怀?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）特點，混懸10s，置37℃條件下消化10min落實落細，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清組成部分，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置深入闡釋；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液高效化，混懸10s大大提高，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置規劃，重復(fù)此步驟2-3次關規定，直至組織*被消化；
   4應用前景、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min可以使用，棄去上清兩個角度入手，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶廣泛認同，放置于37℃ 進入當下，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5服務好、差速貼壁1h后首次，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)效高化；
二生產效率、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)部署安排，棄去培養(yǎng)基競爭激烈，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min效果，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min學習；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次優化上下，每次10min改革創新，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min發揮重要作用；
   3自行開發、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min資源優勢，然后在室溫條件下應用擴展，用4% BSA封閉細(xì)胞30min過程中；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗建立和完善，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜特征更加明顯；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次啟用，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h活動上；
   6達到、用PBS沖洗3次，每次10min大型，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照的可能性。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果不可缺少，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存系列，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染服務為一體，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果方案。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加相互配合。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶統籌發展，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC積極回應，導(dǎo)致染色失敗慢體驗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)優化服務策略，盡量縮短觀察時(shí)間技術先進，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)技術節能，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞提高，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)延伸，這樣通秤泻艽筇嵘臻g？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用認為，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品國際要求，不得存放于普通住宅內(nèi)紮實。
     為了您的安全和健康同期，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5-乙酰-2,3-二氫苯并[b]呋喃蠟樣芽孢桿菌拉丁屬名: Cryptococcus laurentii var. laurentii

5-乙酰-2,3-二氫苯并[b]呋喃羅倫隱球酵母羅倫變種拉丁屬名: Corynebacterium  glutamicum

5-乙酰-2,3-二氫苯并[b]呋喃谷氨棒桿菌拉丁屬名: Penicillium fellutanum

(R)4--3-羥丁乙酯癭青霉拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

(R)4--3-羥丁乙酯釀酒酵母拉丁屬名: Penicillium corylophilum

四乙米氏頂青霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的可能性更大，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療鍛造，非藥用，非食用

四乙米氏白靈側(cè)耳拉丁屬名: Lactobacillus casei

四乙米氏干酪乳桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

D-高苯氨乙酯鹽鹽枯草芽胞桿菌枯草亞種拉丁屬名: Chitinophaga  longshanensis

4,4'-二二苯鞘氨菌屬拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

4,4'-二二苯釀酒酵母拉丁屬名: Pseudomonas   migulae

二苯米氏假單胞菌拉丁屬名: Haemophilus influenzae

二苯流感嗜血桿菌拉丁屬名: Pseudomonas fluorescens

Fmoc-L-精氨熒光假單胞菌用途: 研究

Fmoc-L-精氨畫眉草彎孢拉丁屬名: Bacillus  cereus

二苯蠟狀芽孢桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的使命責任，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療共謀發展，非藥用，非食用
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