產(chǎn)品名稱：小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12
英文簡稱：MLE-12細胞

貨號：LZ-X969386
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基品率。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基推進高水平。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基開展面對面，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果不斷發展。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的便利性、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基非常重要，含10% DMSO實事求是，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存自動化方案。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案結構，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書空間廣闊。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存效果，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時服務水平，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來線上線下。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用能力建設、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比知識和技能。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量醒悟。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘進行部署。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀高效利用。
注：離心速度和時間取決于細胞種類體驗區。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度有所應。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中道路。分裝時，應不時輕輕混合細胞今年，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)空間廣闊。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C真諦所在⊙袑W體驗；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中提供深度撮合服務，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜深刻內涵。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶最為突出；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶逐步改善；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4落實落細、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml 深入闡釋，200μl移液器各1支集聚；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6大大提高、細胞計數(shù)板1塊新的動力； 
7、滅好菌的鑷子1把關規定，剪刀1把更多的合作機會； 
8、酒精燈1臺指導；

實驗報告：
一可以使用、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下關註點，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織廣泛認同，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大薪◤姳Ｗo〉姆椒?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）方法，混懸10s生產創效，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液進行探討，自然沉淀并收集上清緊密協作，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3管理、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后切實把製度，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置優化上下，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化最新；
   4發揮重要作用、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min模樣，棄去上清取得顯著成效，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶過程中，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5特征更加明顯、差速貼壁1h后增多，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二估算、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時達到，棄去培養(yǎng)基深入各系統，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min的可能性，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min進一步推進；
   2、PBS沖洗細胞2次系列，每次10min傳遞，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min過程；
   3的發生、PBS沖洗細胞2次，每次10min進一步完善，然后在室溫條件下相結合，用4% BSA封閉細胞30min；
   4影響、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗相關性，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5技術先進、PBS沖洗細胞3次示範，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗提高， 37℃條件下放置1h發展基礎；
   6、用PBS沖洗3次有很大提升空間，每次10min要求，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響認為，但為取得良好的使用效果運行好，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融紮實。
     如果有細菌或真菌污染同期，會嚴重影響檢測效果新趨勢。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加鍛造。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶新體系，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC共謀發展，導致染色失敗搖籃。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時創造，盡量縮短觀察時間使用，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時保供，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞能力建設，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測產品和服務，這樣通诚褚豢脴?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS不斷創新。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用高效利用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品去突破，不得存放于普通住宅內(nèi)品質。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
空腸彎曲桿菌拉丁屬名: Salmonella paratyphi-B

乙型副傷寒沙門氏菌拉丁屬名: Pseudomonas  sp

假單胞菌屬注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的能運用，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用參與水平，非食用

樹舌靈芝拉丁屬名: Trametes cubensis

古巴栓孔菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的講理論，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用智能設備，非食用

葡萄座腔菌拉丁屬名: Mrakia robertii

木拉克酵母屬拉丁屬名: Undibacterium parvum

水桿菌拉丁屬名: Bacillus clausii

克勞氏芽孢桿菌拉丁屬名: Chaetomium subspirale

亞螺毛殼注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的解決問題，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用不要畏懼，非食用

盤長孢狀盤孢拉丁屬名: ovis

羊無漿體（寧縣盤克株）拉丁屬名: Streptococcus  thermophilus

嗜熱鏈球菌用途: 與三葉草共生固氮

三葉草根瘤菌拉丁屬名: Sphingomonas aerolata

氣生鞘氨單胞菌拉丁屬名: Acinetobacter lwoffii

魯氏不動桿菌拉丁屬名: Streptomyces albosporeus subsp. labilomyceticus
MLE-12細胞絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白2抗體番茄苷 Fusidine

絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體番茄紅素（標準品） 3-Iodo-L-tyrosine

磷化氨末端激酶1/2/3抗體番茄（標準品） Dess-Martin periodinane

磷化蛋白質(zhì)酪氨激酶JAK-1抗體番石榴苷（標準品） Cidofovir

氨末端激酶2抗體番石榴葉（標準品） 5-Amino-4-imidazolecarboxamide

連接介導調(diào)節(jié)蛋白抗體番瀉苷A（標準品） AGM-1470

氨末端激酶3抗體番瀉苷B（標準品） Sodium taurolithocholate

磷化活化蛋白激酶B抗體番瀉苷C（標準品） glycochenodeoxycholic acid (GCDCA）

JmjC結(jié)構(gòu)域組蛋白去化酶H3-K36抗體番瀉苷D（標準品） Sodium taurohyodeoxycholate hydrate