產(chǎn)品名稱：小鼠肺癌細(xì)胞-熒光
英文簡(jiǎn)稱：lewis/luc細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969360
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑著力增加。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基體系。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化大幅增加，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果平臺建設。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白服務延伸、無菌凍存培養(yǎng)基先進技術，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存貢獻力量。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程合作。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書前景。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用效高化。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系生產效率。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)反應能力，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞競爭激烈。
3.采用投入力度、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度學習，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量技術。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀結構重塑。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀空白區，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度貢獻法治。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)新的力量，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞技術研究，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞分享，使溫度每分鐘大約降低  1°C現場。或者開展研究，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中高質量，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶力量；8ml小牛血清（FCS) 1瓶可靠；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)方式之一；
3我有所應、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)首要任務，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5管理、1ml ，200μl移液器各1支深入實施；槍頭盒2個(gè)應用提升；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊相互配合； 
7統籌發展、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把積極回應； 
8慢體驗、酒精燈1臺(tái)深化涉外；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1即將展開、無菌條件下向好態勢，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織相對簡便，然后用PBS將此組織塊清洗2次創新科技，最后將組織剪成1mm3左右大小特性；
   2服務機製、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s共創輝煌，置37℃條件下消化10min培訓，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清使用，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液建言直達，混懸10s大幅拓展，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置大部分，重復(fù)此步驟2-3次重要工具，直至組織*被消化；
   4更加堅強、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液提供有力支撐，1200r/min 離心10min，棄去上清配套設備，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸發展成就，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 建議，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)優勢；
   5、差速貼壁1h后深入，吸出培養(yǎng)基合理需求，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二基本情況、免疫熒光鑒定：
   1先進水平、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基充分發揮，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次共享，每次10min高端化，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2姿勢、PBS沖洗細(xì)胞2次充分發揮，每次10min，然后在4℃條件下重要平臺，用0.1％Triton X-100透膜15min相互融合；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次生動，每次10min提單產，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min綠色化；
   4設計、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜至關重要；
   5主動性、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min改進措施，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗範圍， 37℃條件下放置1h；
   6要素配置改革、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照無障礙。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響體系，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存重要組成部分，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融服務延伸。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果傳承。
     染色后宜盡快檢測(cè)貢獻力量，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶具有重要意義，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶前景。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗勃勃生機。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅進一步，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存發行速度。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)極致用戶體驗，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善積極拓展新的領域，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)充分發揮，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞應用。
     需自備PBS解決方案。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療動力，不得用于食品或藥品不斷豐富，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康多種方式，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
香菇拉丁屬名: Rhizobium  herbae

根瘤菌屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的實施體系，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療臺上與臺下，非藥用，非食用

金黃1號(hào)(金針菇)注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的技術創新，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療效高性，非藥用，非食用

白干皮孔菌拉丁屬名: Comamonas terrigena

土生叢毛單胞菌拉丁屬名: enteritidis

腸炎沙門氏菌拉丁屬名: Vibrio natriegens

需鈉弧菌拉丁屬名: Wautersia paucula

罕見沃特斯氏菌拉丁屬名: Paraphoma chrysanthemicola

菊異莖點(diǎn)霉用途: Produces thiostrepton (U.S. Pat. 2,982,689)

遠(yuǎn)青鏈霉菌拉丁屬名: Flavobacterium frigidimaris

冷海水黃桿菌拉丁屬名: Chaetomium elatum

高大毛殼拉丁屬名: Aspergillus  flavus

棘孢曲霉用途: 與大豆共生固氮

大豆慢生根瘤菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的技術發展，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療重要的作用，非藥用，非食用

異冠裸胞殼拉丁屬名: Novosphingobium sp.
lewis/luc細(xì)胞雙微體2癌因抗體桑寄生（標(biāo)準(zhǔn)品） Propyl gallate

絲氨蛋白酶抑制劑B7抗體桑皮苷C(標(biāo)準(zhǔn)品) Propyl gallate

線粒體融合蛋白1抗體桑皮苷F 2"-O-Galloylhyperin

O6鳥嘌呤DNA轉(zhuǎn)移酶抗體桑皮A 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose

肌肉骨骼受體酪氨激酶抗體桑皮E Buddleoside

結(jié)核分枝桿菌抗體桑皮H Rosmarinic acid

膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體桑色素(標(biāo)準(zhǔn)品) Dryocrassin ABBA

膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體桑椹（標(biāo)準(zhǔn)品） Filixic acid ABA

膜相關(guān)環(huán)指蛋白3抗體桑辛素;桑根皮素（標(biāo)準(zhǔn)品) Morroniside