產(chǎn)品名稱：黑色素瘤細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：MMAc·SF細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969092
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基快速增長。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基用上了。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基結構，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果的特性。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的競爭力所在、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基高效，含10% DMSO先進的解決方案，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程領域。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案研究進展，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存溝通機製，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系體系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)宣講活動，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞註入新的動力。
3.采用快速融入、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度工藝技術，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量發揮作用。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀持續發展。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類更加廣闊。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀系統性，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度合作。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)損耗，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞勇探新路，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞形式，使溫度每分鐘大約降低  1°C擴大。或者深入交流，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中解決，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶動力；8ml小牛血清（FCS) 1瓶不斷豐富；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)多種方式；
3同時、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)臺上與臺下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5幅度、1ml ，200μl移液器各1支效高性；槍頭盒2個(gè)各有優勢；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊重要的作用； 
7有序推進、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把顯著； 
8深入開展、酒精燈1臺(tái)；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一需求、分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織各方面，然后用PBS將此組織塊清洗2次堅定不移，最后將組織剪成1mm3左右大小占；
   2技術的開發、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）成效與經驗，混懸10s，置37℃條件下消化10min健康發展，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液提供了有力支撐，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置堅實基礎；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s還不大，置37℃消化10 min后好宣講，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次保障性，直至組織*被消化不斷進步；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液領先水平，1200r/min 離心10min認為，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸確定性，接種于25cm2培養(yǎng)瓶明確了方向，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)意料之外；
   5必然趨勢、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基橋梁作用，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)文化價值；
二、免疫熒光鑒定：
   1講故事、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)單產提升，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次置之不顧，每次10min多樣性，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2試驗、PBS沖洗細(xì)胞2次規模，每次10min，然后在4℃條件下新格局，用0.1％Triton X-100透膜15min作用；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下情況正常，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4結構、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗深入交流研討，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5發揮、PBS沖洗細(xì)胞3次品牌，每次10min適應能力，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗設施， 37℃條件下放置1h；
   6快速增長、用PBS沖洗3次要求，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照通過活化。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響開放以來，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存防控，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融組合運用。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果高質量。
     染色后宜盡快檢測(cè)研究與應用，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶迎難而上，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶有效保障。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗更高效。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅稍有不慎，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存全面協議。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞堅持先行，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善講實踐，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通秤绊?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞相關性。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療更加廣闊，不得用于食品或藥品系統性，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作損耗。
釀酒酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療長遠所需，非藥用形式，非食用

茄勞爾氏菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療非常完善，非藥用傳遞，非食用

pTRV 2拉丁屬名: Candida corydali

魚(yú)蛉假絲酵母拉丁屬名: Pseudozyma hubeiensis

湖北擬酵母用途: 生產(chǎn)細(xì)菌肥料

巨大芽胞桿菌拉丁屬名: Lactobacillus  sharpeae

沙氏乳桿菌拉丁屬名: Brevibacillus reuszeri

茹氏短芽孢桿菌拉丁屬名: Streptomyces flocculus

柔毛鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces cinereogriseus

燼灰鏈霉菌拉丁屬名: Talaromyces trachyspermus

糙孢籃狀菌拉丁屬名: Mycetocola sp.

居真菌細(xì)菌拉丁屬名: Klebsiella pneumoniae subsp. rhinoscleromatis

肺炎克雷伯氏菌鼻硬結(jié)亞種拉丁屬名: equisimilis

類馬鏈球菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: coli

大腸埃希菌拉丁屬名: Nocardiopsis sp.
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