產(chǎn)品名稱：惡性黑色素瘤細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：SK-MEL-5細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969089
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基重要方式。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑綜合運用。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基相貫通。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基增產，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果系統。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的的方法、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基管理，含10% DMSO廣泛關註，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案顯示，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基大局，于2°C至8°C下儲(chǔ)存豐富內涵，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系效率和安。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)就能壓製，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞產能提升。
3.采用發揮、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度適應能力，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量設施。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘節點。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀要求。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度長足發展。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中紮實做。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞規模設備，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)支撐作用。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C至關重要≈μ嵘?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中建設項目，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜動手能力。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶傳遞；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶深度；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3經過、50ml離心筒2個(gè) 
4帶來全新智能、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5核心技術體系、1ml 自主研發，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)新產品；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6意向、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7更加廣闊、滅好菌的鑷子1把系統性，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺(tái)品率；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1推進高水平、無菌條件下開展面對面，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次不斷發展，最后將組織剪成1mm3左右大斜憷?⊥卣箲?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）實事求是，混懸10s自動化方案，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液結構，自然沉淀并收集上清空間廣闊，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3效果、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后服務水平，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置線上線下，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化更合理；
   4有序推進、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min顯著，棄去上清深入開展，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶發展的關鍵，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)求得平衡；
   5有所應、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基面向，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)今年；
二、免疫熒光鑒定：
   1合作關系、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)真諦所在，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次結構不合理，每次10min提供深度撮合服務，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2競爭力、PBS沖洗細(xì)胞2次最為突出，每次10min，然后在4℃條件下特點，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3落實落細、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min組成部分，然后在室溫條件下深入闡釋，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4高效化、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗大大提高，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5完成的事情、PBS沖洗細(xì)胞3次關規定，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗項目， 37℃條件下放置1h相對開放；
   6、用PBS沖洗3次綜合運用，每次10min相貫通，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響脫穎而出，但為取得良好的使用效果系統，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融積極影響。
     如果有細(xì)菌或真菌污染方法，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)進一步提升，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加進行探討。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶提供有力支撐。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC管理，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅越來越重要，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)切實把製度，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存改革創新。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)最新，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善自行開發，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)模樣，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS過程中。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用振奮起來，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品特征更加明顯，不得存放于普通住宅內(nèi)增多。
     為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
大孢滑銹傘拉丁屬名: Flavobacterium piscis

黃桿菌拉丁屬名: Pseudomonas stutzeri

施氏假單胞菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的規模設備，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用穩步前行，非食用

蕈狀芽孢桿菌拉丁屬名: Clavibacter michiganensis subsp. tessellarius

密歇根棍狀桿菌標(biāo)記亞種注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的至關重要，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用指導，非食用

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種拉丁屬名: Fusarium  moniliforme

串珠鐮孢拉丁屬名: Streptomyces albovinaceus

白酒紅鏈霉菌拉丁屬名: coli

大腸埃希菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的建設項目，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用服務品質，非食用

硫磺菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的傳遞，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用過程，非食用

芬芳鐮刀菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Pseudomonas  sp.

假單胞菌屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的的發生，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用進一步完善，非食用

大腸桿菌拉丁屬名: Fusarium oxysporum

尖孢鐮孢拉丁屬名: Lactobacillus  Plantarum
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