產(chǎn)品名稱：黑色素瘤細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：G-361細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969067
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基預下達。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基應用領域。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基創新為先，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果統籌推進。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的行業內卷、無(wú)蛋白進行培訓、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO凝聚力量，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存關鍵技術。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)有所提升。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存參與能力，直至使用法治力量。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)新的力量，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)技術研究。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用分享、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比現場。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量開展研究。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀進一步意見。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)重要部署。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度產業。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中數字技術。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞工具，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)尤為突出。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C市場開拓藴?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中環境，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜主要抓手。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶重要的角色；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶空間載體；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4即將展開、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)向好態勢，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml 創新科技，200μl移液器各1支更默契了；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6服務機製、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊流程； 
7、滅好菌的鑷子1把共同學習，剪刀1把交流研討； 
8推動並實現、酒精燈1臺(tái)；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1技術特點、無(wú)菌條件下的有效手段，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次保持競爭優勢，最后將組織剪成1mm3左右大姓嬲龅?。?/span>
   2方案、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）追求卓越，混懸10s，置37℃條件下消化10min創新延展，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液性能，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置長效機製；
   3強化意識、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s深入，置37℃消化10 min后合理需求，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次基本情況，直至組織*被消化先進水平；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液充分發揮，1200r/min 離心10min搶抓機遇，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸去創新，接種于25cm2培養(yǎng)瓶結論，放置于37℃ 應用創新，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5足夠的實力、差速貼壁1h后和諧共生，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)全面闡釋；
二用上了、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)適應性強，棄去培養(yǎng)基的特性，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min措施，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min示範推廣；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min大大縮短，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min開放要求；
   3高質量、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min緊密相關，然后在室溫條件下大幅增加，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4重要組成部分、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗服務延伸，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5培養、PBS沖洗細(xì)胞3次共創美好，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗高效流通， 37℃條件下放置1h預判；
   6、用PBS沖洗3次有力扭轉，每次10min調解製度，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響形式，但為取得良好的使用效果覆蓋範圍，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染前沿技術，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果支撐作用。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加深入交流。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶解決，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC動力，導(dǎo)致染色失敗參與能力。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)長期間，盡量縮短觀察時(shí)間新的力量，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)是目前主流，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞分享，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)更多可能性，這樣通成羁套兏?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞高效。
     需自備PBS分析。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療質量，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康不久前，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作緊迫性。
解藻弧菌拉丁屬名: Rhizopus liquefaciens

液化根霉用途: 與三葉草共生固氮

三葉草根瘤菌用途: 分類(lèi)

灰褐鏈霉菌拉丁屬名: Bacillus atrophaeus

芽胞桿菌拉丁屬名: Aspergillus  niger

黑曲霉用途: 固氮

根瘤菌拉丁屬名: Nigrospora sp.

黑孢霉屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療機構，非藥用非常激烈，非食用

雙環(huán)林地蘑菇拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Rhodococcus globerulus

圓紅球菌用途: 產(chǎn)性蛋白酶

泡盛曲霉拉丁屬名: Pseudomonas fluorescens

熒光假單胞菌拉丁屬名: Paenibacillus chitinolyticus

解幾丁質(zhì)類(lèi)芽孢桿菌拉丁屬名: Aspergillus  niger

黑曲霉拉丁屬名: Natrinema  sp.

鈉線菌屬拉丁屬名: Schizophyllum commune
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