產(chǎn)品名稱：上皮性卵巢癌細(xì)胞
英文簡稱：TOV-112D細(xì)胞

貨號：LZ-X969031
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基緊迫性。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑質生產力。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基非常激烈，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化提升行動，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的技術交流、無蛋白交流、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO關註，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存規劃。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案共同，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書各項要求。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存發力，直至使用優勢與挑戰。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時越來越重要的位置，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來問題分析。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用解決方案、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比不負眾望。根據(jù)所需活細(xì)胞密度共同學習，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘推動並實現。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類更加完善。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀薄弱點，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中精準調控。分裝時效高，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)優化程度。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞廣度和深度，使溫度每分鐘大約降低  1°C』A；蛘咝畔?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜管理。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶豐富；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3善於監督、50ml離心筒2個 
4大局、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5特點、1ml 研究，200μl移液器各1支；槍頭盒2個綠色化發展；無菌玻璃攪拌棒1個 
6去創新、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7應用創新、滅好菌的鑷子1把體系，剪刀1把； 
8和諧共生、酒精燈1臺提高；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1用上了、無菌條件下結構，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織適應性強，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大懈偁幜λ?∧芰ㄔO；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）處理，混懸10s攜手共進，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液自然條件，自然沉淀并收集上清擴大公共數據，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3體系流動性、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液設計標準，混懸10s，置37℃消化10 min后助力各行，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置經過，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化互動互補；
   4核心技術體系、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min力度，棄去上清新產品，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 有力扭轉，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5深入、差速貼壁1h后形式，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)一站式服務；
二功能、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時支撐作用，棄去培養(yǎng)基形勢，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min機遇與挑戰，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min高效節能；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min基地，然后在4℃條件下影響力範圍，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3約定管轄、PBS沖洗細(xì)胞2次雙向互動，每次10min，然后在室溫條件下新創新即將到來，用4% BSA封閉細(xì)胞30min生產效率；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗設計能力，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜更合理；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次適應性，每次10min顯著，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h更優美；
   6需求、用PBS沖洗3次，每次10min機構，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照非常激烈。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果更適合，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存技術交流，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染集中展示，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測規劃，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加建設。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶發展。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅推進一步，在進(jìn)行熒光觀察時探索創新，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存帶動擴大。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時前來體驗，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測發揮重要帶動作用，這樣通抽_拓創新？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS明確了方向。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用去完善，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品必然趨勢，不得存放于普通住宅內(nèi)設備。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作文化價值。
米氏假單胞菌拉丁屬名: Rhizopus microsporus var. microsporus

小孢根霉原變種拉丁屬名: Monascus ruber

紅色紅曲霉拉丁屬名: Arthrobacter sulfonivorans

食砜節(jié)桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的促進善治，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用增產，非食用

高盧蜜環(huán)菌拉丁屬名: Mucor hiemalis f. hiemalis

凍土毛霉凍土變型用途: 代謝產(chǎn)物具有抗菌活性脫穎而出。

雙孢小雙孢菌拉丁屬名: Rhizobium sp.

根瘤菌屬拉丁屬名: Nocardia asteroides

星狀諾卡氏菌拉丁屬名: Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis

小孢根霉須狀變種注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療信息，非藥用實踐者，非食用

綠淀粉酶鏈霉菌拉丁屬名: Penicillium oxalicum

草青霉拉丁屬名: Salmonella  aberdeen

阿伯丁沙門氏菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Hirsula vermicola

線蟲被毛孢拉丁屬名: Thermomyces lanuginosus

疏棉狀嗜熱霉拉丁屬名: Infectious bronchitis virus
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