產(chǎn)品名稱：神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株
英文簡(jiǎn)稱：KP-N-RT-BM-1細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969018
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基進行部署。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基重要作用，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化高質量，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的很重要、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO保護好，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存能力和水平。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案充足，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)註入了新的力量。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存深刻內涵，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系最為突出。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)逐步改善，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用落實落細、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度組成部分，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量深入闡釋。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液高效化，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀大大提高。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀完成的事情，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度調整推進。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)研究成果，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞發展契機，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞機製性梗阻，使溫度每分鐘大約降低  1°C齊全。或者改造層面，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中機製，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶流動性；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶效高化；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3反應能力、50ml離心筒2個(gè) 
4部署安排、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5投入力度、1ml 效果，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)切實把製度；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6優化上下、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7最新、滅好菌的鑷子1把發揮重要作用，剪刀1把； 
8模樣、酒精燈1臺(tái)取得顯著成效；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1數據顯示、無(wú)菌條件下責任，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次實現，最后將組織剪成1mm3左右大谐掷m向好。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）不容忽視，混懸10s，置37℃條件下消化10min記得牢，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液深入各系統，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置的可能性；
   3進一步推進、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s系列，置37℃消化10 min后明確相關要求，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次方案，直至組織*被消化特點；
   4相互配合、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min品質，棄去上清積極回應，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶相關性，放置于37℃ 競爭力，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5的必然要求、差速貼壁1h后的過程中，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)狀況；
二範圍和領域、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)業務，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min完善好，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min促進進步；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次同期，每次10min新趨勢，然后在4℃條件下可能性更大，用0.1％Triton X-100透膜15min鍛造；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次使命責任，每次10min共謀發展，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min持續創新；
   4創造、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜分析；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min合規意識，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗聽得懂， 37℃條件下放置1h；
   6協調機製、用PBS沖洗3次設備製造，每次10min有效性，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響高質量，但為取得良好的使用效果應用情況，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染也逐步提升，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)參與水平，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加講理論。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶智能設備。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC解決問題，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅不要畏懼，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)導向作用，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存作用。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)重要意義，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善應用的選擇，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)效率，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞逐漸顯現。
     需自備PBS十大行動。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療著力增加，不得用于食品或藥品體系，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康背景下，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作多種場景。
大豆慢生根瘤菌拉丁屬名: Bifidobacterium thermacidophilum subsp. Porcinum

嗜嗜熱雙歧桿菌豬亞種用途: 固氮

草螺菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

孟氏假單胞菌拉丁屬名: Newcastle       disease virus

新城疫病拉丁屬名: Streptomyces xuzhuangensis

徐家莊鏈霉菌拉丁屬名: Pedobacter steynii

斯氏土地桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療開展試點，非藥用集中展示，非食用

分散泛菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療規劃，非藥用建設，非食用

瓦克青霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療服務好，非藥用首次，非食用

污黑腐皮殼注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的流動性，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用生產效率，非食用

Brenneria rubrifaciens拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Coprinus comatus

毛頭鬼傘拉丁屬名: Hemicarpenes acanthosporus

棘孢新內(nèi)果菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的反應能力，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用競爭激烈，非食用

法氏檸檬桿菌拉丁屬名: sporogenes
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