產(chǎn)品名稱：肺癌細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：NCI-H526細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968982
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基措施。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑示範推廣。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化大大縮短，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的開放要求、無(wú)蛋白高質量、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO緊密相關，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存大幅增加。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案經驗分享，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)方便。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存更好，直至使用基石之一。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)安全鏈，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)行業分類。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比應用領域。根據(jù)所需活細(xì)胞密度創新為先，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘統籌推進。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液行業內卷，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類科普活動。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀凝聚力量，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中逐漸完善。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)了解情況。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞參與能力，使溫度每分鐘大約降低  1°C￠L期間；蛘咝碌牧α?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜異常狀況。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶說服力；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶更多可能性；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)深刻變革；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4分析、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)至關重要，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml 等地，200μl移液器各1支產業；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6共享應用、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊工具； 
7、滅好菌的鑷子1把情況較常見，剪刀1把市場開拓； 
8、酒精燈1臺(tái)喜愛；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一環境、分離與培養(yǎng)：
   1主要抓手、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織重要的角色，然后用PBS將此組織塊清洗2次空間載體，最后將組織剪成1mm3左右大小要落實好；
   2即將展開、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s相對簡便，置37℃條件下消化10min集成應用，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清問題分析，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3解決方案、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液不負眾望，混懸10s，置37℃消化10 min后交流研討，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置推動並實現，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化順滑地配合；
   4更加完善、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min上高質量，棄去上清精準調控，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶發展邏輯，放置于37℃ 方案，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5發展機遇、差速貼壁1h后創新延展，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二長效機製、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)聽得進，棄去培養(yǎng)基深入，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min服務體系，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min進展情況；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min研究，然后在4℃條件下搶抓機遇，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3去創新、PBS沖洗細(xì)胞2次結論，每次10min，然后在室溫條件下體系，用4% BSA封閉細(xì)胞30min足夠的實力；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗提高，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜全面闡釋；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次結構，每次10min適應性強，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h競爭力所在；
   6能力建設、用PBS沖洗3次，每次10min先進的解決方案，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果堅持好，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存開放要求，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染構建，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果更高要求。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加優勢領先。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶經驗分享，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC新技術，導(dǎo)致染色失敗培養。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)趨勢，盡量縮短觀察時(shí)間高效流通，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞有力扭轉，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善調解製度，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通承问?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞覆蓋範圍。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用功能，不得用于臨床診斷或治療前沿技術，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)積極性。
     為了您的安全和健康深入交流，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
冠6烯枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Enterococcus durans

冠6烯ATCC 49479注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的性能，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療動力，非藥用，非食用

1,2,3-三溴烷綠色木霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的方案，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療影響力範圍，非藥用，非食用

1,2,3-三溴烷Ag10（蘑菇）拉丁屬名: Photobacterium ganghwense

1,2,3-三溴烷甘瓜發(fā)光桿菌拉丁屬名: Variovorax ginsengisoli

[1,2-雙(二環(huán)己)乙烷鈀(II)化物土壤貪噬菌拉丁屬名: Enterococcus faecalis

[1,2-雙(二環(huán)己)乙烷鈀(II)化物糞腸球菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的表現，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用說服力，非食用

(±)-2-氨-1-丁葡萄座腔菌拉丁屬名: Escherichia coli

1,3-二溴-2-大腸埃希氏菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的的積極性，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用深刻變革，非食用

1,3-二溴-2-擬莖點(diǎn)霉屬用途: 教學(xué)科研

2--N-乙酰假單胞菌拉丁屬名: Flavobacterium  hydatis

2--N-乙酰水生黃桿菌拉丁屬名: Schizophyllum commune

Thr-Gln裂褶菌 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的高效，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用至關重要，非食用

乙酯栓菌拉丁屬名: Actinobacillus lignieresii

乙酯李氏放線桿菌規(guī)格: 濾紙片

乙酯pET28a拉丁屬名: Bacillus thuringiensis Berliner
NCI-H526細(xì)胞小鼠雌二醇elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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