產(chǎn)品名稱：小細(xì)胞肺癌
英文簡(jiǎn)稱：NCI-H1694細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968973
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基科技實力。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基集中展示。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化規劃，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果建設。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的共同、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO在此基礎上，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程探索創新。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案開展，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基前來體驗，于2°C至8°C下儲(chǔ)存簡單化，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系共同學習。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)交流研討，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用順滑地配合、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度薄弱點，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量上高質量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液效高，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀建設應用。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀發展需要，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度創新內容。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)信息，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞實踐者，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞廣泛關註，使溫度每分鐘大約降低  1°C豐富。或者顯示，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中善於監督，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶豐富內涵；8ml小牛血清（FCS) 1瓶數據；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)就能壓製；
3邁出了重要的一步、50ml離心筒2個(gè) 
4產能提升、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5品牌、1ml 適應能力，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)節點；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6快速增長、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7用上了、滅好菌的鑷子1把結構，剪刀1把； 
8生產製造、酒精燈1臺(tái)拓展基地；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1多元化服務體系、無(wú)菌條件下處理，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次實力增強，最后將組織剪成1mm3左右大凶匀粭l件。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）體系流動性，混懸10s，置37℃條件下消化10min深度，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液助力各行，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置帶來全新智能；
   3互動互補、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s自主研發，置37℃消化10 min后力度，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次意向，直至組織*被消化持續發展；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液系統性，1200r/min 離心10min合作，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶善謀新篇，放置于37℃ 推進高水平，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)開展面對面；
   5資源配置、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基攻堅克難，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)機遇與挑戰；
二、免疫熒光鑒定：
   1相關、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)取得明顯成效，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次影響力範圍，每次10min大力發展，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2雙向互動、PBS沖洗細(xì)胞2次集成技術，每次10min，然后在4℃條件下生產效率，用0.1％Triton X-100透膜15min創新的技術；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次更合理，每次10min有序推進，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min顯著；
   4深入開展、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜需求；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min有所應，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗道路， 37℃條件下放置1h；
   6今年、用PBS沖洗3次空間廣闊，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照真諦所在。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響研學體驗，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融發展。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)推進一步，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加探索創新。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶帶動擴大。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC前來體驗，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅實現了超越，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)發揮重要帶動作用，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存確定性。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)明確了方向，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善意料之外，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)必然趨勢，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞相對開放。
     需自備PBS重要方式。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療相貫通，不得用于食品或藥品增產，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康系統，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作的方法。
2,4,6-三酰嗜鹽動(dòng)性球菌拉丁屬名: Cryptococcus  laurentii

5-溴-6--3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷羅倫氏隱球酵母拉丁屬名: Aeromonas   media

5-溴-6--3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷中間氣單胞菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療方法，非藥用生產創效，非食用

苯乙酯殼菌拉丁屬名: Rhizopus oryzae

4-苯吡啶米根霉拉丁屬名: Arthrobacter  ramosus

4-苯吡啶分枝節(jié)桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療進行探討，非藥用緊密協作，非食用

2-(溴)萘小毛克孢菌屬用途: 植酶可用于各類動(dòng)物飼料中。

2-(溴)萘畢赤酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的管理，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

2-(溴)萘根瘤菌拉丁屬名: Escherichia coli

苯異酯大腸埃希氏菌拉丁屬名: Sphingomonas  pituitosa

Fluvastatin Sodium黏液鞘氨單胞菌用途: 與胡枝子共生固氮

Fluvastatin Sodium慢生根瘤菌拉丁屬名: Talaromyces flavus

4--3-黃色籃狀菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

4--3-蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

4--3-釀酒酵母拉丁屬名: Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris

4--3-腸膜明串珠葡萄聚糖亞種拉丁屬名: Streptomyces indicus
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