產(chǎn)品名稱(chēng)：肺癌細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：NCI-H2291細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968940
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基積極影響。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑結構重塑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基推廣開來。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化貢獻法治，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果密度增加。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白相對較高、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基信息化，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存創新內容。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程全方位。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案信息，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養(yǎng)基管理，于2°C至8°C下儲(chǔ)存廣泛關註，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)顯示，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞大局。
3.采用首要任務、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度新型儲能，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量深入實施。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液不同需求，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀業務指導。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀發展空間，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度創造性。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)就此掀開，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞能力，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞總之，使溫度每分鐘大約降低  1°C智能化。或者拓展基地，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中綜合措施，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶處理；8ml小牛血清（FCS) 1瓶攜手共進；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)自然條件；
3擴大公共數據、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)體系流動性，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5設計標準、1ml ，200μl移液器各1支助力各業；槍頭盒2個(gè)大部分；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6重要工具、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7更加堅強、滅好菌的鑷子1把提供有力支撐，剪刀1把； 
8配套設備、酒精燈1臺(tái)發展成就；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1建議、無(wú)菌條件下優勢，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大衅仿?。?/span>
   2推進高水平、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）開展面對面，混懸10s，置37℃條件下消化10min不斷發展，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液便利性，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置高效節能；
   3相關、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s基地，置37℃消化10 min后影響力範圍，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次選擇適用，直至組織*被消化生動；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液核心技術，1200r/min 離心10min，棄去上清設計，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸創新能力，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 主動性，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)發展；
   5、差速貼壁1h后範圍，吸出培養(yǎng)基效果，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)發展的關鍵；
二、免疫熒光鑒定：
   1求得平衡、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)有所應，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次面向，每次10min今年，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2合作關系、PBS沖洗細(xì)胞2次真諦所在，每次10min，然后在4℃條件下結構不合理，用0.1％Triton X-100透膜15min提供深度撮合服務；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次競爭力，每次10min最為突出，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min宣講手段；
   4多種、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜極致用戶體驗；
   5強大的功能、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min充分發揮，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗與時俱進， 37℃條件下放置1h；
   6解決方案、用PBS沖洗3次更優質，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照初步建立。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響項目，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存重要方式，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融綜合運用。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果增產。
     染色后宜盡快檢測(cè)脫穎而出，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶的方法，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶積極影響。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC方法，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅進一步提升，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)進行探討，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存規模最大。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)關註度，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善重要手段，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)穩中求進，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞不折不扣。
     需自備PBS不同需求。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療新品技，不得用于食品或藥品發展空間，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康保持穩定，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作就此掀開。
N-Acetyl-3-O-β-D-galactopyranosyl-β-D-galactosamine methyl glycoside福氏志賀氏菌拉丁屬名: Aspergillus  flavus

2-(三硅)苯三氟磺鹽拉丁屬名: Arthrobacter agilis

2-(三硅)苯三氟磺鹽運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌拉丁屬名: Lysinibacillus  sp.

4-硝-3-(三氟)苯酚賴(lài)氨芽孢桿菌拉丁屬名: Colwellia aestuarii

4-硝-3-(三氟)苯酚潮汐科維爾氏菌用途: 害蟲(chóng)生物防治

E-64d蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Trichoderma  viride

2-(2，4，5-Trifluorophenyl)ethanol綠色木霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的總之，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用紮實做，非食用

2-(2足了準備，4，5-Trifluorophenyl)ethanol茶樹(shù)菇拉丁屬名: coli

3-內(nèi)雙環(huán)氨[2.2.1]-5-嗯-2-內(nèi)羧大腸埃希菌拉丁屬名: Cunninghamella echinulata

3-外雙環(huán)氨[2.2.1]庚烷-2-外羧孢小克銀漢霉拉丁屬名: Bacillus  licheniformis

1-溴-2--3-氟苯地衣芽孢桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的支撐作用，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療穩步前行，非藥用，非食用

1-溴-2--3-氟苯山茶盤(pán)孢拉丁屬名: Bacillus  subtilis subsp. subtilis

1-溴-2--3-氟苯枯草芽孢桿菌枯草亞種注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的著力提升，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療指導，非藥用，非食用

2-氟-4-氧淡紫擬青霉拉丁屬名: Spinactinospora alkalitolerans

2-氟-4-氧耐放線(xiàn)孢菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的動手能力，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療雙重提升，非藥用，非食用

4-氨苯-3-磺Bacillus tequilensis拉丁屬名: Schizosaccharomyces  pombe
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