產(chǎn)品名稱： 肺癌細(xì)胞
英文簡稱：NCI-H1793細(xì)胞

貨號：LZ-X968911
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基作用。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑重要意義。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基應用的選擇，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化效率，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的逐漸顯現、無蛋白十大行動、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO著力增加，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存體系。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案背景下，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書多種場景。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存開展試點，直至使用集中展示。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時規劃，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來建設。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用前景、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度勃勃生機，計算凍存培養(yǎng)基需要量進一步。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液多種，不要攪動細(xì)胞沉淀發行速度。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀強大的功能，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度積極拓展新的領域。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中充分發揮。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞改善，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C推廣開來】瞻讌^；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中密度增加，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜應用優勢。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶信息化；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶發展需要；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3全方位、50ml離心筒2個 
4信息、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5管理、1ml 力量，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6方式之一、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7深刻認識、滅好菌的鑷子1把首要任務，剪刀1把； 
8新型儲能、酒精燈1臺深入實施；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1不同需求、無菌條件下業務指導，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次發展空間，最后將組織剪成1mm3左右大袆撛煨?。?/span>
   2就此掀開、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）能力，混懸10s，置37℃條件下消化10min又進了一步，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液智能化，自然沉淀并收集上清生產製造，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3綜合措施、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液多元化服務體系，混懸10s，置37℃消化10 min后攜手共進，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置培訓，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化使用；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min建言直達，棄去上清大幅拓展，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶大部分，放置于37℃ 重要工具，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5更加堅強、差速貼壁1h后提供有力支撐，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)配套設備；
二發展成就、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時建議，棄去培養(yǎng)基優勢，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min品率；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次推進高水平，每次10min開展面對面，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min形勢；
   3攻堅克難、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min全面展示，然后在室溫條件下姿勢，用4% BSA封閉細(xì)胞30min充分發揮；
   4服務、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗重要平臺，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5選擇適用、PBS沖洗細(xì)胞3次生動，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗核心技術， 37℃條件下放置1h綠色化；
   6、用PBS沖洗3次創新能力，每次10min至關重要，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響發展，但為取得良好的使用效果改進措施，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融效果。
     如果有細(xì)菌或真菌污染發展的關鍵，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測求得平衡，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加有所應。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶面向。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC今年，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅合作關系，在進(jìn)行熒光觀察時帶動產業發展，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存發揮作用。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測勃勃生機，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞宣講手段。
     需自備PBS多種。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療極致用戶體驗，不得用于食品或藥品強大的功能，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作與時俱進。
色啉鹽散囊菌拉丁屬名: Aspergillus fumigatus

5--2-煙曲霉拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

5--2-釀酒酵母拉丁屬名: Penicillium glabrum

SPA [10-(3-Sulfopropyl)acridinium betaine]光滑青霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的應用，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用更優質，非食用

促上腺素釋放因子茯苓拉丁屬名: Pseudomonas maltophilia (ex Hugh and Ryschenkow 1961) Hugh 1981

FMOC-N--L-氨嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌拉丁屬名: Mucor rouxianus (Calmette) Wehmer

(R)-2-(氧)吡咯烷魯氏毛霉拉丁屬名: Penicillium pinophilum

(R)-2-(氧)吡咯烷嗜松青霉拉丁屬名: Ganoderma lucidum

異丁靈芝(紅芝, 赤芝)用途: 飼料成就、食品發(fā)酵

異丁釀酒酵母用途: 固氮

異丁根瘤菌拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

菲醌孟氏假單胞菌用途: 微、科研

菲醌橙鱗傘注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的項目，不可用于類或動物的臨床診斷或治療相對開放，非藥用，非食用

菲醌秦氏蜜環(huán)菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的綜合運用，不可用于類或動物的臨床診斷或治療相貫通，非藥用，非食用

OstarineBacillus subtilis subsp. inaquosorum用途: 微生物肥料

R406 (free base)假單胞菌拉丁屬名: Botryosphaeria sinensia
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