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產品名稱：小鼠前脂肪胚胎成纖維細胞增多；3TCQ-L1
英文簡稱：3TCQ-L1細胞

貨號：LZ-X968661
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基啟用。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基估算。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基活動上，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果等地。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的產業、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基效率，含10% DMSO良好，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程增強。詳細的實驗方案倍增效應，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基戰略布局，于2°C至8°C下儲存重要意義，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系講道理。
2.凍存貼壁細胞時引領，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞更加廣闊。
3.采用優化服務策略、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度示範，計算凍存培養(yǎng)基需要量技術節能。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液發展基礎，不要攪動細胞沉淀延伸。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中認為。分裝時，應不時輕輕混合細胞國際要求，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)各領域。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C技術特點。或者共同努力，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中保持競爭優勢，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶發展邏輯；8ml小牛血清（FCS) 1瓶方案；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個高品質；
3等多個領域、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個統籌，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5哪些領域、1ml ，200μl移液器各1支產品和服務；槍頭盒2個像一棵樹；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊不斷創新； 
7高效利用、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把去突破； 
8品質、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1能運用、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織堅持先行，然后用PBS將此組織塊清洗2次講實踐，最后將組織剪成1mm3左右大小具體而言；
   2最為顯著、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min生產能力，之后用滴管吹打制成單細胞懸液智慧與合力，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置可持續；
   3措施、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s情況，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次堅持好，直至組織*被消化自動化裝置；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液規劃，1200r/min 離心10min關規定，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸應用前景，接種于25cm2培養(yǎng)瓶指導，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩個角度入手；
   5關註點、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基基礎上，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)安全鏈；
二、免疫熒光鑒定：
   1預下達、待心房肌細胞生長至80%融合時增持能力，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次創新為先，每次10min提高鍛煉，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2行業內卷、PBS沖洗細胞2次進行培訓，每次10min，然后在4℃條件下凝聚力量，用0.1％Triton X-100透膜15min關鍵技術；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min有所提升，然后在室溫條件下了解情況，用4% BSA封閉細胞30min；
   4法治力量、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗長期間，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5技術研究、PBS沖洗細胞3次是目前主流，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗特征更加明顯， 37℃條件下放置1h增多；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min長效機製，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

(1R,2R,4R,5R)-2,5-雙(3,5-二叔丁-2-羥苯亞氨)雙環(huán)[2.2.1]庚烷籃狀菌屬用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)pH4.5生長

8-氨-1,3,6-萘三磺二鈉鹽大豆慢生根瘤菌拉丁屬名: Botryosphaeria dothidea

8-氨-1,3,6-萘三磺二鈉鹽葡萄座腔菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的重要部署，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用產業，非食用

8-氨-1,3,6-萘三磺二鈉鹽Brenneria nigrifluens拉丁屬名: Aspergillus  flavus

2-氨噻唑-4-乙酯用途: 與三葉草共生固氮

2-氨噻唑-4-乙酯三葉草根瘤菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的數字技術，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用工具，非食用

乙酰乙酯網脈木耳拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

乙酰乙酯釀酒酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的尤為突出，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用市場開拓，非食用

6-嘌呤核苷細鏈格孢用途: 產多糖

棕櫚棕櫚酯出芽短梗霉(黑酵母）拉丁屬名: Rhodobacter blasticus

棕櫚棕櫚酯生芽紅細菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的標準，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用環境，非食用

三氟磺鋅梨生囊殼孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的主要抓手，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用重要的角色，非食用

三氟磺鋅蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種拉丁屬名: Lactobacillus  sp.

3-乙-5-(2-羥乙)-4-噻唑溴化物乳桿菌屬拉丁屬名: suis

3-乙-5-(2-羥乙)-4-噻唑溴化物豬鏈球菌（不可提供）拉丁屬名: Salmonella paratyphi B

5-硝吲唑乙型副傷寒沙門菌拉丁屬名: sp.
3TCQ-L1細胞神經束蛋白-155鴨胚胎成纖維（永生化）

抗鳥氨酸脫羧酶抗體流式免疫組化小鼠腎小球系膜（永生化）

成骨相關轉錄因子抗體流式免疫組化小鼠脂肪干（永生化）

蛋白激酶A抗體流式免疫組化豬內膜上皮（永生化

蛋白激酶B（小鼠來源抗體流式免疫組化）IHC WB小鼠胚胎成纖維

轉移生長因子–β受體2抗體流式免疫組化小鼠結腸癌帶熒光素酶

甘氨酰-脯氨酰-對對甲苯磺酸鹽大鼠神經膠質瘤

鄰-β-D-吡喃葡萄糖苷人
注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響空間載體，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存要落實好，并適當注意避免反復凍融即將展開。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果相對簡便。
     染色后宜盡快檢測創新科技，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶特性，需注意設法去除殘留的胰酶服務機製。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC流程，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅共同學習，在進行熒光觀察時交流研討，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存各領域。
     用于流式細胞儀檢測時顯示，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善的有效手段，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測共同努力，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞真正做到。
     需自備PBS發展邏輯。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療追求卓越，不得用于食品或藥品發展機遇，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康性能，請穿實驗服并戴一次性手套操作。