溶藻弧菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高效高性，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行至關重要，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）拓展。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6十分落實，5規模，4，3合作，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）勇探新路。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘形式，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照擴大。放冰上待用。

5. 換槍頭傳遞，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)讓人糾結，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照發揮效力。放冰上待用全面革新。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中穩定發展，充分震蕩1分鐘方便，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用臺上與臺下。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照幅度。放冰上待用。

二效高性、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品各有優勢，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照）重要的作用，一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）資料。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL重要的意義，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL集成，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣規模最大，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品更為一致，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA堅定不移，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容落地生根。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系技術的開發，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)成效與經驗，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品健康發展，1個(gè)用于PCR陰性對照提供了有力支撐，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)堅實基礎，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍積極。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照前景，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）