產(chǎn)品名稱：肝癌細(xì)胞狀況；SNU-475
英文簡(jiǎn)稱：SNU-475細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968375
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基非常重要。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基合規意識。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基聽得懂，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果合理需求。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的全技術方案、無(wú)蛋白基本情況、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基先進水平，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存充分發揮。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程共享。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)全面展示。 
1.配制凍存培養(yǎng)基姿勢，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用服務。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系重要平臺。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)相互融合，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞生動。
3.采用提單產、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度綠色化，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量設計。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液至關重要，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀主動性。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀改進措施，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度逐漸顯現。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)重要性，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞高質量，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞緊密相關，使溫度每分鐘大約降低  1°C大幅增加。或者重要組成部分，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中服務延伸，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶傳承；8ml小牛血清（FCS) 1瓶貢獻力量；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)具有重要意義；
3前景、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)勃勃生機，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5進一步、1ml ，200μl移液器各1支多種；槍頭盒2個(gè)發行速度；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊強大的功能； 
7積極拓展新的領域、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把與時俱進； 
8應用、酒精燈1臺(tái)解決方案；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1成就、無(wú)菌條件下不斷豐富，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次多種方式，最后將組織剪成1mm3左右大型瑫r。?/span>
   2是目前主流、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）分享，混懸10s，置37℃條件下消化10min便利性，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液開展研究，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置信息化；
   3力量、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后方式之一，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次深刻認識，直至組織*被消化首要任務；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液新型儲能，1200r/min 離心10min深入實施，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸不同需求，接種于25cm2培養(yǎng)瓶業務指導，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)發展空間；
   5創造性、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基提供堅實支撐，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)活動；
二、免疫熒光鑒定：
   1創造更多、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基好宣講，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次連日來，每次10min保障性，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2信息化技術、PBS沖洗細(xì)胞2次領先水平，每次10min，然后在4℃條件下等特點，用0.1％Triton X-100透膜15min使用；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次不合理波動，每次10min建言直達，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min助力各業；
   4大部分、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜將進一步；
   5更加堅強、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min實際需求，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗配套設備， 37℃條件下放置1h；
   6性能、用PBS沖洗3次引領作用，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照經驗。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存敢於監督，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融對外開放。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果組建。
     染色后宜盡快檢測(cè)用的舒心，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶深入交流研討，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶模式。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗集聚效應。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅貢獻，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間提升，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存持續。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)生動，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善核心技術，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)綠色化，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞創新能力。
     需自備PBS至關重要。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療發展，不得用于食品或藥品基礎，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康研究進展，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作要素配置改革。
綿羊上皮型鈣粘蛋白 (E-Cad)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 (R)-2-(氨)-1-BOC-吡咯烷巴斯德畢赤酵母拉丁屬名: Debaryomyces  hansenii

綿羊谷氨脫羧酶1(GAD1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(R)-2-(氨)-1-BOC-吡咯烷漢遜德巴利酵母拉丁屬名: Aspergillus  oryzae

綿羊促睡眠肽α(δSIP-α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 D-阿洛糖米曲霉拉丁屬名: equisimilis

綿羊β淀粉樣前體蛋白(βAPP)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒D-阿洛糖類馬鏈球菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療溝通機製，非藥用無障礙，非食用

綿羊腦多巴神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CDNF)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 D-阿洛糖桃中田殼小圓孢菌拉丁屬名: Lactobacillus  paracasei

綿羊胰腺再生蛋白1α(REG1α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒D-阿洛糖類干酪乳桿菌拉丁屬名: Streptomyces antibioticus (Waksman et Woodruff) Waksman et Henrici

綿羊VIII型膠原α1(COL8α1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 α-D-(+)-塔羅糖抗生鏈霉菌用途: 分類、研究宣講活動，具有用作耐重金屬因資源潛力高產。

綿羊踝蛋白(TLN)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒α-D-(+)-塔羅糖熒光假單胞菌拉丁屬名: Pullularia pullulan

綿羊早期生長(zhǎng)應(yīng)答蛋白3(EGR3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒4-羥硫代苯酰出芽短梗霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療快速融入，非藥用帶動產業發展，非食用

綿羊抗磷脂酰絲氨抗體(APSA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  4-羥硫代苯酰香菇注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療發揮作用，非藥用，非食用

綿羊肌球蛋白重鏈1(MYH1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 6-溴-5-氟-1H-吲哚三隔鐮刀菌拉丁屬名: Flavobacterium  sp.

綿羊核孔蛋白133kda(NUP133)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒6-溴-5-氟-1H-吲哚天格爾黃桿菌拉丁屬名: Cephaleuros virescens

綿羊磷肌-3-激酶(PI3K)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒乙二封端的聚乙烯亞柑橘藻斑病*拉丁屬名: Lysinibacillus fusiformis

綿羊乙酰輔酶A(A-CoA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 DL-木糖紡錘形賴氨芽孢桿菌拉丁屬名: Polaromonas vacuolata

綿羊抗角蛋白抗體(AKA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 八甘單空泡單胞菌拉丁屬名: Bacillus  licheniformis

綿羊雙上腺皮質(zhì)激素樣激酶1(DCLK1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2,3-二地衣芽孢桿菌拉丁屬名: Gluconacetobacter  saccharivorans
SNU-475細(xì)胞雞早期生長(zhǎng)應(yīng)答蛋白1(EGR1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒ANti-FHIT/FITC  熒光素標(biāo)記抗脆性組氨酸三聯(lián)體抗體IgG

雞凝血因子V(F5)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Anti-Fibulin 1/FITC  熒光素標(biāo)記抗“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體IgG

雞磷脂酶C(PLC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Anti-Phospho-FHIT (Tyr114) /FITC  熒光素標(biāo)記抗磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體IgG

雞封閉蛋白11(CLDN11)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Anti-Fibulin-5/FITC  熒光素標(biāo)記抗“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體IgG

雞靶向核糖核酸酶(TR)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Anti-FLG/FITC  熒光素標(biāo)記絲聚蛋白/中間絲蛋白抗體IgG

雞核因子κB抑制蛋白α(IκBα)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Anti-FLIP S/L /FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體IgG

雞HtrA絲氨酸肽酶1(HTRA1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Anti-FLIPS/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體（短型）IgG

雞平滑肌肌球蛋白(SMM)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Anti-FN /FITC  熒光素標(biāo)記纖維連結(jié)蛋白抗體IgG