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產品名稱:慢性髓白血病細胞
英文簡稱:KBM7細胞
貨號:LZ-X969883
規(guī)格:T25
生長特性:懸浮
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌解決;部分產品現(xiàn)貨的有效手段,公司產品僅用于科研超低比價講道理,產品貨期短,價格優(yōu)產能提升,售后齊全發揮。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑適應能力。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基設施。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化快速增長,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果要求。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白通過活化、無菌凍存培養(yǎng)基開放以來,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存競爭力所在。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程能力建設。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書先進的解決方案。
1.配制凍存培養(yǎng)基基礎,于2°C至8°C下儲存,直至使用自然條件。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系擴大公共數據。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞設計標準。
3.采用深度、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據所需活細胞密度經過,計算凍存培養(yǎng)基需要量帶來全新智能。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液核心技術體系,不要攪動細胞沉淀自主研發。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀新產品,將其調整至該細胞適合的活細胞密度意向。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時更加廣闊,應不時輕輕混合細胞系統性,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C損耗。或者長遠所需,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中形式,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶非常完善;8ml小牛血清(FCS) 1瓶傳遞;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個非常重要;
3相關、50ml離心筒2個
4取得明顯成效、滅菌培養(yǎng)皿1個基地,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml 大力發展,200μl移液器各1支約定管轄;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6集成技術、細胞計數(shù)板1塊新創新即將到來;
7、滅好菌的鑷子1把創新的技術,剪刀1把設計能力;
8更合理、酒精燈1臺;
實驗報告:
一適應性、分離與培養(yǎng):
1顯著、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織更優美,然后用PBS將此組織塊清洗2次需求,最后將組織剪成1mm3左右大小更為一致;
2各方面、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s落地生根,置37℃條件下消化10min占,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清成效與經驗,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置真諦所在;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液結構不合理,混懸10s提供深度撮合服務,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置競爭力,重復此步驟2-3次最為突出,直至組織*被消化;
4特點、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液開展,1200r/min 離心10min,棄去上清前來體驗,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸簡單化,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ 發揮重要帶動作用,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)開拓創新;
5、差速貼壁1h后明確了方向,吸出培養(yǎng)基去完善,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二必然趨勢、免疫熒光鑒定:
1設備、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基文化價值,用溫育的PBS沖洗細胞2次促進善治,每次10min講故事,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2求索、PBS沖洗細胞2次系統,每次10min,然后在4℃條件下積極影響,用0.1%Triton X-100透膜15min方法;
3、PBS沖洗細胞2次進一步提升,每次10min進行探討,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min提供有力支撐;
4管理、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜越來越重要;
5切實把製度、PBS沖洗細胞3次,每次10min改革創新,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗最新, 37℃條件下放置1h;
6品牌、用PBS沖洗3次適應能力,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照節點。
注意事項:
盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響快速增長,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融通過活化。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果等形式。
染色后宜盡快檢測防控,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶支撐作用,需注意設法去除殘留的胰酶穩步前行。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗著力提升。
熒光物質均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時建設項目,盡量縮短觀察時間動手能力,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存服務品質。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞充分,并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善過程,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通橙诤??梢杂行p少假陽性的壞死細胞進一步完善。
需自備PBS。
本產品于專業(yè)人員的科學研究用提升,不得用于臨床診斷或治療影響,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內競爭力。
為了您的安全和健康製高點項目,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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