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C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點:
1. 實驗開始前等形式,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌防控,用70%ethanol擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后的特點,才可以進行實驗操作高質量。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基適應性,以避免細胞間污染或失誤混淆迎難而上。實驗完成后,請將實驗物品拿出工作臺激發創作,用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面更高效。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后,才能進行下一個細胞株的操作探索。
2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管重要作用、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置進一步完善,其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出,有利于空氣流通提升。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成相關性,請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作競爭力。
3. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌污染更加廣闊。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處系統性,也不要在打開的容器正上方進行操作合作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身損耗,傾斜大約45°角取用勇探新路,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全形式,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗擴大。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進行(至少是Class II)傳遞。操作過程中讓人糾結,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生,小心有毒性藥品發揮效力,例如DMSO和TPA等全面革新,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度穩定發展、溫度方便、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)更好。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力基石之一,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng)服務水平,3000小時/HEPA)線上線下。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水能力建設。
NRK-52E知識和技能,大鼠腎細胞
H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)
C2C12, 小鼠肌原細胞
NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系
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293A,人胚腎上皮細胞系(腺病毒包裝級別)
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HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞
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3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞