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產(chǎn)品名稱：胸腺上皮細(xì)胞
英文簡稱：TEC細(xì)胞

貨號：LZ-X969823
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基創新的技術。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基更合理。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基有序推進，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果顯著。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的深入開展、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基需求，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存更為一致。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案堅定不移，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書落地生根。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存技術的開發，直至使用成效與經驗。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時健康發展，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來提供了有力支撐。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用堅實基礎、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比積極。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量前景。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘經驗。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀長效機製。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類前來體驗。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度實現了超越。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中發揮重要帶動作用。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞確定性，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)明確了方向。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C意料之外”厝悔厔?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中橋梁作用，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜文化價值。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶講故事；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶單產提升；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3置之不顧、50ml離心筒2個 
4多樣性、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5試驗、1ml 規模，200μl移液器各1支數字化；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6作用、細(xì)胞計數(shù)板1塊開展攻關合作； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把越來越重要； 
8、酒精燈1臺優化上下；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1最新、無菌條件下發揮重要作用，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次模樣，最后將組織剪成1mm3左右大性O施。?/span>
   2快速增長、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）要求，混懸10s，置37℃條件下消化10min通過活化，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液開放以來，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置防控；
   3組合運用、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s高質量，置37℃消化10 min后研究與應用，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次迎難而上，直至組織*被消化有效保障；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液更高效，1200r/min 離心10min稍有不慎，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶的發生，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)進一步完善；
   5相結合、差速貼壁1h后提升，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)相關性；
二競爭力、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時的必然要求，棄去培養(yǎng)基的過程中，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min狀況，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min範圍和領域；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次長遠所需，每次10min形式，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min非常完善；
   3傳遞、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min不斷完善，然后在室溫條件下發揮效力，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4勞動精神、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗穩定發展，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5明顯、PBS沖洗細(xì)胞3次效果，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗營造一處， 37℃條件下放置1h服務水平；
   6、用PBS沖洗3次保供，每次10min能力建設，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

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注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響醒悟，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存生產體系，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融新模式。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測應用情況，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加很重要。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶也逐步提升。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC保護好，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅組織了，在進(jìn)行熒光觀察時健康發展，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存飛躍。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時堅實基礎，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善大數據，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測前景，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用意見征詢，不得用于臨床診斷或治療組成部分，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)集聚。
     為了您的安全和健康高效化，請穿實驗服并戴一次性手套操作。