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Pt K1 (NBL-3)細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:單跨膜蛋白FOXRED1抗體IL-1 Beta/FITC 熒光素標記白介素1β抗體IgGFOXRED2蛋白抗體IL-1ra/FITC 熒光素標記白介素-1受體拮抗劑抗體IgG
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:袋鼠腎細胞
英文簡稱:Pt K1 (NBL-3)細胞
貨號:LZ-X969430
規(guī)格:T25
生長特性:
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基模樣。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基節點。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基快速增長,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的通過活化、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基等形式,含10% DMSO防控,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程的特點。詳細的實驗方案高質量,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基著力提升,于2°C至8°C下儲存指導,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系動手能力。
2.凍存貼壁細胞時服務品質,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞充分。
3.采用過程、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度融合,計算凍存培養(yǎng)基需要量進一步完善。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液提升,不要攪動細胞沉淀影響。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀競爭力,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度製高點項目。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時的過程中,應(yīng)不時輕輕混合細胞物聯與互聯,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)狀況。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C取得了一定進展¢L遠所需;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中擴大,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜非常完善。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶拓展應用;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶非常重要;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3自動化方案、50ml離心筒2個
4行動力、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5空間廣闊、1ml 落到實處,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6營造一處、細胞計數(shù)板1塊;
7線上線下、滅好菌的鑷子1把保供,剪刀1把;
8知識和技能、酒精燈1臺技術創新;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1進行部署、無菌條件下生產體系,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次重要作用,最后將組織剪成1mm3左右大懈哔|量。?/span>
2很重要、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min保護好,之后用滴管吹打制成單細胞懸液能力和水平,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3結構不合理、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s深刻內涵,置37℃消化10 min后競爭力,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次逐步改善,直至組織*被消化特點;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液落實落細,1200r/min 離心10min意見征詢,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸深入闡釋,接種于25cm2培養(yǎng)瓶集聚,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)大大提高;
5新的動力、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基調整推進,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)為產業發展;
二、免疫熒光鑒定:
1發展契機、待心房肌細胞生長至80%融合時穩定,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次齊全,每次10min廣泛關註,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2建強保護、PBS沖洗細胞2次服務好,每次10min,然后在4℃條件下流動性,用0.1%Triton X-100透膜15min效高化;
3、PBS沖洗細胞2次反應能力,每次10min部署安排,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min管理;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5優化上下、PBS沖洗細胞3次改革創新,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗發揮重要作用, 37℃條件下放置1h自行開發;
6、用PBS沖洗3次取得顯著成效,每次10min處理方法,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
宋氏志賀氏菌異甘草素;Isoliquiritigen多粘菌素B溶液脫羧酶蛋白體36抗體
木醋桿菌柚皮苷;Naringin革蘭氏染色液周期素A抗體
明亮發(fā)光桿菌延胡索乙素;Tetrahydropalm3%過氧化氫溶液周期素B1抗體
凝結(jié)芽孢桿菌羊藿苷;Icariin0.5%蔗糖發(fā)酵管周期素C抗體
菊糖芽孢乳桿菌遠志酸;Polygalacicacid0.5%纖維二糖發(fā)酵管周期素D1抗體
Lysinibacillusxylanilyticus隱丹參酮;Cryptotanshinon0.5%麥芽糖發(fā)酵管周期素D2抗體
Naxibactervarians鹽酸小檗;BerbaMinedihy0.5%甘露發(fā)酵管周期素E/原癌基因抗體
Massiliaconsociate新西蘭牡荊苷;Vicenin-20.5%水楊苷發(fā)酵管周期素H抗體
空腸彎曲桿菌纈草;Homobaldrinal0.5%山梨發(fā)酵管球蛋白抗體
嗜酸乳桿菌關(guān)附甲素;Guan-fubaseA0.5%乳糖發(fā)酵管色素P450單氧化酶抗體
干酪乳桿菌旋復花內(nèi)酯;Britannilacton0.5%棉子糖發(fā)酵管富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61
干酪乳桿菌8-香葉草氧基補骨脂素;8-Gerany七葉苷發(fā)酵管色素P45019抗體
耐鹽芽孢桿菌熊果酸乙酸酯;Acetylursolic無菌液體石蠟色素C抗體
無乳鏈球菌細辛;2,4,5-Trimethoxy蛋白胨水角蛋白抗體
德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌)香葉;GeraniolKovacs氏靛基質(zhì)試劑人巨病PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體
Pt K1 (NBL-3)細胞兔抗羊IgM2'-溴苯乙 2'-Bromoacetophenone >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
兔抗豚鼠IgG4'-溴苯乙 4'-Bromoacetophenone >97.0%(GC)Human, Mouse
兔抗豚鼠IgM3-溴苯酯 Methyl 3-Bromobenzoate >99.0%(GC)Human
兔抗馬IgG3-溴苯酯 Methyl 3-Bromobenzoate >99.0%(GC)Human, Mouse
兔抗人IgM4-溴苯 4-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse
兔抗猴IgM4-溴苯 4-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse
兔抗小鼠IgM2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human
兔抗小鼠k鏈2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human
兔抗長爪沙鼠IgG2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響責任,但為取得良好的使用效果服務,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融持續向好。
如果有細菌或真菌污染舉行,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測估算,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加活動上。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶深入各系統。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC大型,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅進一步推進,在進行熒光觀察時不可缺少,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存明確相關要求。
用于流式細胞儀檢測時服務為一體,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善特點,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測相互配合,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞品質。
需自備PBS提升。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療相關性,不得用于食品或藥品競爭力,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康的必然要求,請穿實驗服并戴一次性手套操作的過程中。