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產(chǎn)品名稱：犬腎細胞支撐作用；MDCK(NBL-2)
英文簡稱：MDCK細胞

貨號：LZ-X969308
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長　

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基穩步前行。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基認為。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基責任製，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果良好。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的雙重提升、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基大幅拓展，含10% DMSO助力各業，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程重要工具。詳細的實驗方案將進一步，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基提供有力支撐，于2°C至8°C下儲存實際需求，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系發展成就。
2.凍存貼壁細胞時性能，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞優勢。
3.采用設計、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度品率，計算凍存培養(yǎng)基需要量善謀新篇。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀供給。
注：離心速度和時間取決于細胞種類不斷發展。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度拓展應用。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中模式。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞集聚效應，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)貢獻。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C提升〕掷m；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜高品質。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶設計；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶創新能力；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3主動性、50ml離心筒2個 
4發展、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5範圍、1ml 效果，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6求得平衡、細胞計數(shù)板1塊； 
7道路、滅好菌的鑷子1把面向，剪刀1把； 
8空間廣闊、酒精燈1臺合作關系；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1工藝技術、無菌條件下發揮作用，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次系統，最后將組織剪成1mm3左右大小規模；
   2逐步顯現、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）作用，混懸10s，置37℃條件下消化10min近年來，之后用滴管吹打制成單細胞懸液銘記囑托，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置交流等；
   3製造業、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s自動化裝置，置37℃消化10 min后狀態，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次成就，直至組織*被消化初步建立；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液相對開放，1200r/min 離心10min重要方式，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸相貫通，接種于25cm2培養(yǎng)瓶增產，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)系統；
   5各有優勢、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基重要的作用，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)資料；
二、免疫熒光鑒定：
   1重要的意義、待心房肌細胞生長至80%融合時集成，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次關註度，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2穩中求進、PBS沖洗細胞2次橫向協同，每次10min，然后在4℃條件下再獲，用0.1％Triton X-100透膜15min穩定性；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min資源優勢，然后在室溫條件下應用擴展，用4% BSA封閉細胞30min；
   4振奮起來、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗建立和完善，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5增多、PBS沖洗細胞3次啟用，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗規模設備， 37℃條件下放置1h不斷進步；
   6、用PBS沖洗3次領先水平，每次10min認為，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

葡萄座腔菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的效率，不可用于類或動物的臨床診斷或治療良好，非藥用，非食用

PL28（平菇）拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Streptomyces  microflavus

細黃鏈霉菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的增強，不可用于類或動物的臨床診斷或治療倍增效應，非藥用，非食用

圍小叢殼菌拉丁屬名: Penicillium oxalicum

草青霉用途: 植物病原菌,引起木材形成海綿狀白色腐朽,可藥用戰略布局。

毛革蓋菌拉丁屬名: Rhizopus arrhizus var. arrhizus

少根根霉原變種拉丁屬名: Enterococcus  begiensis sp. nov.

腸球菌屬拉丁屬名: Bacillus safensis

沙福芽孢桿菌拉丁屬名: Escherichia  coli

大腸埃希氏桿菌拉丁屬名: Candida  tropicalis

熱帶假絲酵母拉丁屬名: Pseudomonas sp.

假單胞菌屬拉丁屬名: Rhizobium oryzae

水稻根瘤菌拉丁屬名: Planomicrobium chinense

中華游動微菌拉丁屬名: Lactococcus  lactis subsp. cremoris

乳乳球菌乳脂亞種拉丁屬名: Nocardiopsis alkaliphila
MDCK細胞生物素標(biāo)記的兔抗猴IgM氨苯砜(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

性磷酶（AP）標(biāo)記的兔抗猴IgM氨芐西林/氨芐青霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgM氨芐西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗猴IgM氨丁三（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

FITC標(biāo)記的兔抗猴IgM氨芬鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

羅丹明標(biāo)記的兔抗猴IgM氨比林（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgG氨己（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG氨三乙（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

性磷酶（AP）標(biāo)記的兔抗小鼠IgG氨苯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響重要意義，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存講道理，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融引領。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果更加廣闊。
     染色后宜盡快檢測優化服務策略，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶示範，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶技術節能。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗發展基礎。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅延伸，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間要求，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時認為，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善聯動，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通筹@示？梢杂行p少假陽性的壞死細胞效果較好。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用貢獻，不得用于臨床診斷或治療廣泛應用，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)持續。
     為了您的安全和健康情況，請穿實驗服并戴一次性手套操作。