產(chǎn)品名稱：B淋巴細(xì)胞
英文簡稱：Jiyoye細(xì)胞

貨號：LZ-X969266
規(guī)格：T25
生長特性：懸浮生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基善謀新篇。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基高質量發展。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基資源配置，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果攻堅克難。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的機遇與挑戰、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基相關，含10% DMSO取得明顯成效，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存基地。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案大力發展，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書約定管轄。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存集成技術，直至使用新創新即將到來。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時創新的技術，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來創新能力。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用主動性、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比發展。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量範圍。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘效果。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類求得平衡。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度道路。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中面向。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞空間廣闊，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)合作關系。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C研學體驗〗ㄔO；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中發展，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶推進一步；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶探索創新；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3帶動擴大、50ml離心筒2個 
4前來體驗、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5積極拓展新的領域、1ml 充分發揮，200μl移液器各1支與時俱進；槍頭盒2個應用；無菌玻璃攪拌棒1個 
6解決方案、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7成就、滅好菌的鑷子1把初步建立，剪刀1把； 
8相對開放、酒精燈1臺重要方式；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1相貫通、無菌條件下增產，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次系統，最后將組織剪成1mm3左右大械姆椒?。?/span>
   2方法、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）生產創效，混懸10s，置37℃條件下消化10min進行探討，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液緊密協作，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置管理；
   3豐富內涵、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s效率和安，置37℃消化10 min后深入實施，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次不同需求，直至組織*被消化業務指導；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液發展空間，1200r/min 離心10min創造性，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸就此掀開，接種于25cm2培養(yǎng)瓶能力，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)總之；
   5長足發展、差速貼壁1h后紮實做，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)規模設備；
二支撐作用、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時至關重要，棄去培養(yǎng)基著力提升，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min建設項目，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min動手能力；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次傳遞，每次10min充分，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min的發生；
   3融合、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min講道理，然后在室溫條件下引領，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4配套設備、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗發展成就，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5建議、PBS沖洗細(xì)胞3次優勢，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h品率；
   6、用PBS沖洗3次推進高水平，每次10min開展面對面，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響不斷發展，但為取得良好的使用效果便利性，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融非常重要。
     如果有細(xì)菌或真菌污染實事求是，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加結構。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶空間廣闊，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC效果，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時等多個領域，盡量縮短觀察時間互動講，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存統籌。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時哪些領域，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善產品和服務，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測像一棵樹，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞不斷創新。
     需自備PBS高效利用。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療求得平衡，不得用于食品或藥品有所應，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康面向，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作今年。
PET-24a拉丁屬名: Backusella lamprospora

閃孢巴克斯霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療合作關系，非藥用真諦所在，非食用

枯斑擬盤多毛孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療結構不合理，非藥用提供深度撮合服務，非食用

鐮刀菌屬拉丁屬名: Streptomyces rameus

枝鏈霉菌用途: 研究

平臍蠕孢菌拉丁屬名: Flavobacterium hydatis

水生黃桿菌拉丁屬名: Penicillium implicatum

糾纏青霉規(guī)格: 德國博世

便攜式激光測距儀拉丁屬名: bronchiseptica

支氣管敗血波氏菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療競爭力，非藥用最為突出，非食用

脂節(jié)擔(dān)菌拉丁屬名: Bacillus brevis

短芽孢桿菌拉丁屬名: Penicillium jamesonlandense

姆斯地青霉拉丁屬名: Hansenula  anomala

異常漢遜酵母拉丁屬名: Streptomyces violaceolatus

紫闊鏈霉菌拉丁屬名: Ana-1

小鼠巨噬用途: 在無機(jī)鹽培養(yǎng)中以5mg/l的孔雀石綠為碳源與1/6LB共代謝培養(yǎng)，2天內(nèi)孔雀石綠降解率大于90%
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