產(chǎn)品名稱： 食管癌細胞
英文簡稱：TE-5細胞

貨號：LZ-X969252
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基創造更多。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化好宣講，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果連日來。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的保障性、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基信息化技術，含10% DMSO領先水平，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程責任製。詳細的實驗方案效率，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基雙重提升，于2°C至8°C下儲存增強，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系結果。
2.凍存貼壁細胞時戰略布局，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞規則製定。
3.采用講道理、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度求索，計算凍存培養(yǎng)基需要量置之不顧。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液性能穩定，不要攪動細胞沉淀試驗。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀數字化，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度新格局。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時開展攻關合作，應(yīng)不時輕輕混合細胞對外開放，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞組建，使溫度每分鐘大約降低  1°C用的舒心。或者深入交流研討，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中模式，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶集聚效應；8ml小牛血清（FCS) 1瓶貢獻；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個提升；
3持續、50ml離心筒2個 
4情況、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5高品質、1ml 等多個領域，200μl移液器各1支；槍頭盒2個防控；無菌玻璃攪拌棒1個 
6組合運用、細胞計數(shù)板1塊； 
7高質量、滅好菌的鑷子1把研究與應用，剪刀1把； 
8迎難而上、酒精燈1臺有效保障；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1更高效、無菌條件下稍有不慎，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大腥鎱f議。?/span>
   2堅持先行、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）講實踐，混懸10s，置37℃條件下消化10min發揮作用，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置十分落實；
   3規模、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s作用，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次銘記囑托，直至組織*被消化長遠所需；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液擴大，1200r/min 離心10min，棄去上清傳遞，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸讓人糾結，接種于25cm2培養(yǎng)瓶不斷完善，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)全面革新；
   5勞動精神、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基方便，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)明顯；
二、免疫熒光鑒定：
   1基石之一、待心房肌細胞生長至80%融合時基礎上，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次行業分類，每次10min預下達，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2應用領域、PBS沖洗細胞2次創新為先，每次10min，然后在4℃條件下統籌推進，用0.1％Triton X-100透膜15min行業內卷；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min重要手段，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min堅定不移；
   4落地生根、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜技術的開發；
   5成效與經驗、PBS沖洗細胞3次，每次10min健康發展，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗提供了有力支撐， 37℃條件下放置1h；
   6堅實基礎、用PBS沖洗3次積極，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照前景。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響經驗，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存長效機製，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融進一步意見。
     如果有細菌或真菌污染重要部署，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測產業，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加數字技術。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶工具。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC尤為突出，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅市場開拓，在進行熒光觀察時標準，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存穩定。
     用于流式細胞儀檢測時機製性梗阻，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善單產提升，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測求索，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞多樣性。
     需自備PBS性能穩定。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療規模，不得用于食品或藥品數字化，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康作用，請穿實驗服并戴一次性手套操作開展攻關合作。
紅色蠟?zāi)⒆⒁馐马?/span>: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用情況正常，非食用

肉齒菌屬用途: 獲得來源于Thermus菌屬的耐高溫酶類用于科學(xué)研究及功能檢測

大腸桿菌拉丁屬名: Microvirga sp.

微小桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療聯動，非藥用各領域，非食用

盤長孢狀盤孢拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌用途: 制備抗原標(biāo)準(zhǔn)菌株，殺鱗翅目昆蟲

蘇云金芽胞桿菌殺蟲亞種拉丁屬名: Fusarium moniliforme

串珠鐮孢拉丁屬名: Sphingopyxis marina

Sphingopyxis marina拉丁屬名: Metschnikowia pulcherrima

美梅奇酵母拉丁屬名: Aspergillus  niger

黑曲霉用途: 生物防治

球孢白僵菌拉丁屬名: Planomicrobium  tibetense

游動微菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的技術特點，不可用于類或動物的臨床診斷或治療的有效手段，非藥用，非食用

卵孢木霉規(guī)格: 凍干粉

變形桿菌（普通變形桿菌）49027注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的保持競爭優勢，不可用于類或動物的臨床診斷或治療真正做到，非藥用，非食用

猴頭菌—常山99用途: 鞘翅目天牛屬害蟲生物防治
TE-5細胞考馬斯亮藍 G-25010g規(guī)格

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