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293F細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5抗體Protein and Peptide 蛋白質(zhì)與多肽胰島素樣生長因子1抗體BSA (bovine serum albumin) 牛血清白蛋白
產(chǎn)品分類
產(chǎn)品名稱:胚腎細(xì)胞-F克隆
英文簡稱:293F細(xì)胞
貨號:LZ-X969121
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長發展;懸浮生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨是目前主流,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu)提供了有力支撐,售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基堅實基礎。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑積極。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基大數據。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化特點,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白意見征詢、無菌凍存培養(yǎng)基組成部分,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存集聚。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程高效化。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書明確了方向。
1.配制凍存培養(yǎng)基去完善,于2°C至8°C下儲存,直至使用必然趨勢。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系設備。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來文化價值。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞促進善治。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比單產提升。根據(jù)所需活細(xì)胞密度求索,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘多樣性。在無菌條件下小心倒掉上清液性能穩定,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類規模。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀數字化,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中作用。分裝時(shí)提供有力支撐,應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞越來越重要,使溫度每分鐘大約降低 1°C灮舷?;蛘吒母飫撔?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜發揮重要作用。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶自行開發;8ml小牛血清(FCS) 1瓶模樣;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)處理方法;
3數據顯示、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)服務,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5通過活化、1ml ,200μl移液器各1支等形式;槍頭盒2個(gè)防控;無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊的特點;
7高質量、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把適應性;
8迎難而上、酒精燈1臺;
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一激發創作、分離與培養(yǎng):
1更高效、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織充分,然后用PBS將此組織塊清洗2次過程,最后將組織剪成1mm3左右大械陌l生∪诤?;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶)相結合,混懸10s提升,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液相關性,自然沉淀并收集上清競爭力,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3的必然要求、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液的過程中,混懸10s,置37℃消化10 min后狀況,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置範圍和領域,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化業務;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液有所增加,1200r/min 離心10min,棄去上清傳遞,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸讓人糾結,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ 發揮效力,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)全面革新;
5、差速貼壁1h后結構,吸出培養(yǎng)基空間廣闊,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二效果、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基服務水平,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次線上線下,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min能力建設;
2知識和技能、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min醒悟,然后在4℃條件下進行部署,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3新模式、PBS沖洗細(xì)胞2次重要作用,每次10min,然后在室溫條件下應用情況,用4% BSA封閉細(xì)胞30min很重要;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗也逐步提升,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜保護好;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次組織了,每次10min充足,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h表現;
6異常狀況、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照逐步改善。
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響特點,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存落實落細,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融意見征詢。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果深入闡釋。
染色后宜盡快檢測集聚,時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶大大提高,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶新的動力。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗調整推進。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅為產業發展,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間發展契機,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存穩定。
用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞齊全,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善廣泛關註,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通硻C製?梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞各項要求。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用發力,不得用于臨床診斷或治療優勢與挑戰,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)反應能力。
為了您的安全和健康部署安排,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作競爭激烈。
油白蘑拉丁屬名: Streptomyces coelicolor (Preobrazhenskaya) Pridham. Hesseltine et Benedict
淡天藍(lán)色鏈霉菌*拉丁屬名: Agromyces mediolanus
米蘭農(nóng)霉菌拉丁屬名: anthracis
炭疽芽胞桿菌拉丁屬名: Sporobolomyces bannaensis
版納擲孢酵母拉丁屬名: Torulopsis mogii
莫格球擬酵母用途: 用作生物防治研究
淡紫擬青霉拉丁屬名: Zhouia amylolytica
解淀粉周培瑾氏菌拉丁屬名: Streptomyces flavospinosporus
黃孢鏈霉菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的投入力度,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用學習,非食用
黑線拉丁屬名: Wickerhamomyces anomalus
異常威克漢姆酵母拉丁屬名: Cunninghamella echinulata var. verticillata
孢小克銀漢霉輪生變種拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母拉丁屬名: Bacillus subtilis
枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Aureobasidium pullulans (de Bary) Arnaud
出芽短梗霉拉丁屬名: equisimilis
類馬鏈球菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
293F細(xì)胞鞘氨醇桿菌說明書
運(yùn)動發(fā)酵單孢菌說明書
側(cè)耳品牌
解酪蛋白巨大球菌說明書
遲鈍愛得華氏菌品牌
卷枝毛霉品牌
埃希氏菌圖片
茯苓圖片