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RIPA 裂解液 ( 強 )00mL操作步驟:
RIPA 裂解液 ( 強 )00mL哪里有賣切取含有目的DNA 片段的瓊脂糖凝膠條帶先進的解決方案。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠,減少凝膠體積高品質,提高DNA 回收率充分發揮。
● 切膠時共享,請使用長波長UV (360 nm )光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外燈下全面展示,以防DNA 損傷姿勢。
2 稱取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法:取.5 ml 離心管電子天平稱初質(zhì)量服務,切膠裝在離心管后稱終質(zhì)量重要平臺,兩者差即為膠的質(zhì)量。不同離心管的重量可能有差異選擇適用,因此生動,每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每00 mg 瓊脂糖凝膠對應00 µl 溶液BD 的比例核心技術,向離心管中加入溶液BD蓬勃發展。
4 50 ℃水浴7-0min,直至凝膠*溶化重要意義。期間需要振蕩混合3 次問題。
● 瓊脂糖必須*融化,以免堵塞柱子效率,嚴重影響DNA 段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl,可適當增加溶膠時間堅持好。
● 若此時溶液變紅開放要求,可加0 µl 3M NaAC (pH 5.2)。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中構建,靜置2min 緊密相關。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA 的能力較弱平臺建設。
6 2,000 rpm 離心min重要組成部分。若溶液量大于DNA 純化柱的容積服務延伸,可分兩次離心,棄濾液傳承。
● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上貢獻力量。
7 加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm, 離心min具有重要意義,棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE前景。2,000 rpm, 離心min,棄濾液勃勃生機。
● 溶液PE 初次使用前用無水乙醇按: 4 稀釋進一步,即含80% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白多種、鹽等雜質(zhì)洗脫發行速度,以獲得高質(zhì)量DNA 段。
9 加入500 µl 溶液PE強大的功能。2,000 rpm, 離心min積極拓展新的領域,棄濾液。
0 2,000 rpm 離心 3min 與時俱進,以*去除純化柱中的液體深入交流。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應有所提升。同時也利于DNA 段的充分溶解了解情況。
將離心柱置于新的.5 ml 離心管中。向純化柱的處法治力量,懸空滴加30-00 µl 溶液Eluent (60℃預熱)長期間,靜置2min 。2,000 rpm 離心min技術研究,管底即為目的DNA 段是目前主流。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替現場,但其pH 需為8.0-8.5便利性,加入體積視DNA 目的段的多少、用戶對目的濃度要求而定高質量。
● 對溶液Eluent 60℃預熱信息化,會提高提取DNA 目的段的產(chǎn)量。