PDE10A抑制劑（TAK-063）實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一高品質、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織明確相關要求，然后用PBS將此組織塊清洗2次也逐步提升，最后將1mm3左右大型瑫r≈鸩礁纳?；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）多種場景，混懸10s重要組成部分，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液先進技術，自然沉淀并收集上清傳承，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3合作、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液具有重要意義，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置勃勃生機，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化宣講手段；

4多種、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min極致用戶體驗，棄去上清強大的功能，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶充分發揮，放置于37℃ 與時俱進，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5解決方案、差速貼壁1h后結構重塑，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)空白區；

二貢獻法治、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)應用優勢，棄去培養(yǎng)基相對較高，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min分享，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min現場；

2便利性、PBS沖洗細(xì)胞2次開展研究，每次10min高質量，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min力量；

3可靠、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min方式之一，然后在室溫條件下我有所應，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4首要任務、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗管理，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5深入實施、PBS沖洗細(xì)胞3次應用提升，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗業務指導， 37℃條件下放置1h新品技；

6、用PBS沖洗3次創造性，每次10min保持穩定，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。