產(chǎn)品名稱：豬腎細(xì)胞系；PK13
英文簡(jiǎn)稱：PK13細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968697
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑自動化方案。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基行動力。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化空間廣闊，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果落到實處。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基營造一處，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存線上線下。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程保供。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書知識和技能。 
1.配制凍存培養(yǎng)基技術創新，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用進行部署。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系生產體系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞更為一致。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比堅定不移。根據(jù)所需活細(xì)胞密度落地生根，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘空間廣闊。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液合作關系，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類研學體驗。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀結構不合理，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中深刻內涵。分裝時(shí)競爭力，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)逐步改善。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞特點，使溫度每分鐘大約降低  1°C÷鋵嵚浼?；蛘咭庖娬髟?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中組成部分，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶集聚；8ml小牛血清（FCS) 1瓶高效化；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)新的動力；
3完成的事情、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)為產業發展，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5研究成果、1ml ，200μl移液器各1支穩定；槍頭盒2個(gè)機製性梗阻；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊增產； 
7脫穎而出、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把的方法； 
8、酒精燈1臺(tái)方法；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一生產創效、分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下進行探討，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織緊密協作，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大泄芾??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）切實把製度，混懸10s優化上下，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液最新，自然沉淀并收集上清發揮重要作用，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3模樣、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液取得顯著成效，混懸10s，置37℃消化10 min后數據顯示，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置責任，重復(fù)此步驟2-3次服務，直至組織*被消化；
   4持續向好、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液啟用，1200r/min 離心10min，棄去上清估算，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸活動上，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 深入各系統，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)大型；
   5、差速貼壁1h后建設項目，吸出培養(yǎng)基動手能力，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二傳遞、免疫熒光鑒定：
   1充分、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基的發生，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次融合，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min相結合；
   2提升、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min相關性，然后在4℃條件下競爭力，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3的必然要求、PBS沖洗細(xì)胞2次的過程中，每次10min，然后在室溫條件下狀況，用4% BSA封閉細(xì)胞30min範圍和領域；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗要求，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次運行好，每次10min國際要求，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h同期；
   6新趨勢、用PBS沖洗3次可能性更大，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照新體系。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響使命責任，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存搖籃，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融持續創新。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果服務水平。
     染色后宜盡快檢測(cè)線上線下，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶能力建設，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶知識和技能。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗醒悟。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅進行部署，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間新模式，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存重要作用。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞品質，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善提供了遵循，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通衬苓\用？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS參與水平。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用講理論，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品智能設備，不得存放于普通住宅內(nèi)解決問題。
     為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作不要畏懼。
11-馬來(lái)酰亞十一藤黃微球菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的導向作用，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用作用，非食用

11-馬來(lái)酰亞十一銹蘑拉丁屬名: Aspergillus unguis

11-馬來(lái)酰亞十一爪曲霉拉丁屬名: Pestalotiopsis theae

9-(4-溴苯)咔唑茶擬盤多毛孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的重要意義，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用應用的選擇，非食用

9-(4-溴苯)咔唑雙氮纖維單胞菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的效率，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

3,6-二溴-9-苯咔唑裂褶菌拉丁屬名: Elytrosporangium  sp.

3,6-二溴-9-苯咔唑鞘孢囊菌拉丁屬名: Bacillus clausii

Laropiprant克勞氏芽孢桿菌拉丁屬名: Streptomyces fradiae

2-四-3-硫弗氏鏈霉菌拉丁屬名: Penicillium citrnum Thom

2-四-3-硫桔青霉拉丁屬名: Methylobacterium platani

對(duì)Methylobacterium platani拉丁屬名: Escherichia  coli

對(duì)大腸埃希氏桿菌拉丁屬名: Pseudosalinisphaera  profundimaris

對(duì)Pseudosalinisphaera注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的十大行動，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療大大提高，非藥用，非食用

2-氧苯竹喙球菌拉丁屬名: Fusarium solani

2-氧苯腐皮鐮孢用途: 代謝產(chǎn)物不具有抗菌活性完成的事情。

2-氧苯小單孢菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的調整推進，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用研究成果，非食用
PK13細(xì)胞BOC-L-蘇氨酸人肺腺癌阿霉素耐藥株

D-2-氨基丁酸人黑色素瘤耐阿霉素株

BOC-D-天冬酰低轉(zhuǎn)移人肝癌

蝸牛凝集素人骨髓瘤

丁酰膽堿酯酶人B淋巴瘤

放線菌素D人鼻中隔鱗狀癌

5′-腺苷一磷酸人多發(fā)性骨髓瘤

2′-脫氧胞苷-5′-三磷酸二鈉鹽人淋巴母