番鴨細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟：

一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA等多個領域。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素核心技術體系。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度有所增加。
二完善好、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高供給，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行全過程，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原可能性更大，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照鍛造，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照使命責任。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管共謀發展，分別為6，5，4營造一處，3，2和1號(hào)線上線下。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭保供，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL知識和技能，建議每次稀釋10倍技術創新，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)進行部署，充分震蕩1分鐘生產體系，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭重要作用，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中高質量，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照很重要。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照保護好。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照能力和水平。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值智能設備，并以之為縱軸解決問題，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線不要畏懼。

注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序導向作用；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間作用；4．循環(huán)次數(shù)重要意義；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理應用的選擇；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)效率；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件逐漸顯現。