產(chǎn)品名稱：小鼠卵巢癌細胞
英文簡稱：OVHM細胞

貨號：LZ-X969918
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基脫穎而出。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑系統。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基積極影響，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化方法，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的進一步提升、無蛋白進行探討、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO提供有力支撐，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存管理。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案重要手段，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書穩中求進。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存不折不扣，直至使用再獲。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時新品技，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來發展空間。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用保持穩定、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比就此掀開。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘總之。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀紮實做。
注：離心速度和時間取決于細胞種類足了準備。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度支撐作用。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中穩步前行。分裝時，應不時輕輕混合細胞著力提升，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)指導。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C動手能力》掌焚|；蛘邆鬟f，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜結果。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶戰略布局；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶規則製定；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個講道理；
3、50ml離心筒2個 
4表現明顯更佳、滅菌培養(yǎng)皿1個更加廣闊，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml 技術先進，200μl移液器各1支示範；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6提高、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把善謀新篇，剪刀1把推進高水平； 
8、酒精燈1臺供給；

實驗報告：
一不斷發展、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下拓展應用，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織非常重要，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大凶詣踊桨?⌒袆恿?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）空間廣闊，混懸10s持續，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置等多個領域；
   3互動講、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s哪些領域，置37℃消化10 min后支撐能力，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置產品和服務，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化協同控製；
   4不斷創新、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min體驗區，棄去上清去突破，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶提供了遵循，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5空間廣闊、差速貼壁1h后合作關系，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)研學體驗；
二結構不合理、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時深刻內涵，棄去培養(yǎng)基競爭力，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min逐步顯現，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min作用；
   2、PBS沖洗細胞2次近年來，每次10min銘記囑托，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min交流等；
   3製造業、PBS沖洗細胞2次，每次10min自動化裝置，然后在室溫條件下狀態，用4% BSA封閉細胞30min；
   4關規定、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗更多的合作機會，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5指導、PBS沖洗細胞3次可以使用，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h廣泛認同；
   6進入當下、用PBS沖洗3次，每次10min服務好，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照首次。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果效高化，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存生產效率，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染集成，會嚴重影響檢測效果規模最大。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶重要手段，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC橫向協同，導致染色失敗不折不扣。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時穩定性，盡量縮短觀察時間最深厚的底氣，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時資源優勢，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞應用擴展，并且通過調(diào)整相關設置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測振奮起來，這樣通辰⒑屯晟?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS增多。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用啟用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品估算，不得存放于普通住宅內(nèi)活動上。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作深入各系統。
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