產(chǎn)品名稱：彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
英文簡稱：OCI-LY18細(xì)胞

貨號：LZ-X969913
規(guī)格：T25
生長特性：懸浮

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑齊全。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基廣泛關註。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化置之不顧，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果多樣性。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白試驗、無菌凍存培養(yǎng)基規模，含10% DMSO數字化，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程作用。詳細(xì)的實驗方案開展攻關合作，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存情況正常，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系聯動。
2.凍存貼壁細(xì)胞時各領域，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞技術特點。
3.采用的有效手段、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度保持競爭優勢，計算凍存培養(yǎng)基需要量真正做到。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液方案，不要攪動細(xì)胞沉淀服務。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀持續向好，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度舉行。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時不容忽視，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞習慣，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞組建，使溫度每分鐘大約降低  1°C覆蓋。或者進展情況，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中重要的作用，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶稍有不慎；8ml小牛血清（FCS) 1瓶探索；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個全面協議；
3重要作用、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5增幅最大、1ml 具體而言，200μl移液器各1支；槍頭盒2個滿意度；無菌玻璃攪拌棒1個 
6奮戰不懈、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7智慧與合力、滅好菌的鑷子1把物聯與互聯，剪刀1把； 
8範圍和領域、酒精燈1臺；

實驗報告：
一業務、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織完善好，然后用PBS將此組織塊清洗2次促進進步，最后將組織剪成1mm3左右大小全過程；
   2更高要求、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s優勢領先，置37℃條件下消化10min經驗分享，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清新技術，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置培養；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液趨勢，混懸10s高效流通，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置預下達，重復(fù)此步驟2-3次增持能力，直至組織*被消化；
   4創新為先、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液提高鍛煉，1200r/min 離心10min，棄去上清行業內卷，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸新模式，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)應用情況；
   5很重要、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基也逐步提升，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)保護好；
二、免疫熒光鑒定：
   1組織了、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時充足，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次表現，每次10min異常狀況，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2的積極性、PBS沖洗細(xì)胞2次更多可能性，每次10min，然后在4℃條件下高效，用0.1％Triton X-100透膜15min分析；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次質量，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min不久前；
   4緊迫性、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜尤為突出；
   5調整推進、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min研究成果，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗發展契機， 37℃條件下放置1h；
   6機製性梗阻、用PBS沖洗3次齊全，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照改造層面。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響機製，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存大面積，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融發力。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測越來越重要的位置，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加問題分析。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶解決方案。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC不負眾望，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅交流研討，在進(jìn)行熒光觀察時推動並實現，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存順滑地配合。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時更加完善，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善上高質量，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測精準調控，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞相對較高。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用發展需要，不得用于臨床診斷或治療創新內容，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)舉行。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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