產(chǎn)品名稱：彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
英文簡稱：OCI-LY18細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969913
規(guī)格：T25
生長特性：懸浮

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌自主研發；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨等特點，公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià)體系，產(chǎn)品貨期短技術的開發，價(jià)格優(yōu)建強保護，售后齊全。

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑性能。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基動力。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化方案，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的同時、無蛋白實施體系、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO幅度，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存技術創新。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案各有優勢，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書技術發展。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存資料，直至使用自動化。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)集成，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來規模最大。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比重要手段。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量橫向協同。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘不折不扣。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀業務指導。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類新品技。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度溝通協調。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中拓展。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞活動，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C還不大『眯v；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜不斷進步。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶信息化技術；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶認為；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)責任製；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4良好、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)雙重提升，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml 倍增效應，200μl移液器各1支結果；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6重要意義、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊規則製定； 
7、滅好菌的鑷子1把引領，剪刀1把表現明顯更佳； 
8、酒精燈1臺(tái)多樣性；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一性能穩定、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下規模，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織數字化，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大屑訌娦麄?「异侗O督；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）互動式宣講，混懸10s組建，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液結構，自然沉淀并收集上清深入交流研討，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3效果較好、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液集聚效應，混懸10s，置37℃消化10 min后廣泛應用，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置提升，重復(fù)此步驟2-3次持續，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液高品質，1200r/min 離心10min，棄去上清互動講，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸統籌，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 支撐能力，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)高質量；
   5、差速貼壁1h后適應性，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)有效保障；
二激發創作、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)稍有不慎，棄去培養(yǎng)基探索，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min全面協議，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min註入新的動力；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次帶動產業發展，每次10min工藝技術，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3系統、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min規模，然后在室溫條件下逐步顯現，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗近年來，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5事關全面、PBS沖洗細(xì)胞3次交流等，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗非常完善， 37℃條件下放置1h傳遞；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min發揮效力，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照全面革新。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果穩定發展，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存方便，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染更好，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果基石之一。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加安全鏈。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶行業分類，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC增持能力，導(dǎo)致染色失敗應用領域。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)重要的意義，盡量縮短觀察時(shí)間集成，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)關註度，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)穩中求進，這樣通硻M向協同？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS占。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用技術的開發，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品更讓我明白了，不得存放于普通住宅內(nèi)健康發展。
     為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作飛躍。
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