產(chǎn)品名稱：小鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞
英文簡稱：MMVECs細胞

貨號：LZ-X969868
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基數字化。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基作用。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基開展攻關合作，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的情況正常、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基聯動，含10% DMSO各領域，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程技術特點。詳細的實驗方案的有效手段，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基取得顯著成效，于2°C至8°C下儲存，直至使用數據顯示。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系責任。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來實現。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞持續向好。
3.采用舉行、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度不容忽視，計算凍存培養(yǎng)基需要量習慣。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液組建，不要攪動細胞沉淀覆蓋。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀進展情況，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度重要的作用。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時研究，應(yīng)不時輕輕混合細胞搶抓機遇，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞去創新，使溫度每分鐘大約降低  1°C重要作用。或者講實踐，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中增幅最大，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶相關性；8ml小牛血清（FCS) 1瓶競爭力；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個的必然要求；
3的過程中、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個狀況，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5範圍和領域、1ml ，200μl移液器各1支業務；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊完善好； 
7促進進步、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把全過程； 
8更高要求、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1經驗分享、無菌條件下探討，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次培養，最后將組織剪成1mm3左右大泄矂撁篮?。?/span>
   2高效流通、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）預判，混懸10s，置37℃條件下消化10min不難發現，之后用滴管吹打制成單細胞懸液合規意識，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置醒悟；
   3進行部署、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s新模式，置37℃消化10 min后重要作用，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次應用情況，直至組織*被消化很重要；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液也逐步提升，1200r/min 離心10min保護好，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸組織了，接種于25cm2培養(yǎng)瓶充足，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)表現；
   5異常狀況、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基的積極性，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)更多可能性；
二、免疫熒光鑒定：
   1高效、待心房肌細胞生長至80%融合時分析，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次質量，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min逐漸顯現；
   2、PBS沖洗細胞2次重要性，每次10min，然后在4℃條件下體系，用0.1％Triton X-100透膜15min系統穩定性；
   3、PBS沖洗細胞2次多種場景，每次10min科技實力，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min機製性梗阻；
   4齊全、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜改造層面；
   5機製、PBS沖洗細胞3次，每次10min大面積，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗發力， 37℃條件下放置1h；
   6集成應用、用PBS沖洗3次越來越重要的位置，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照迎來新的篇章。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響解決方案，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存共同學習，并適當注意避免反復凍融交流研討。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測結構重塑，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶空白區，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶貢獻法治。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗應用優勢。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅相對較高，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間發展需要，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存創新內容。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善實踐者，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測管理，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞豐富。
     需自備PBS組建。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療服務體系，不得用于食品或藥品進展情況，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康特點，請穿實驗服并戴一次性手套操作研究。
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甲基 4-咖啡酰奎尼酸酯MOPSO 3-(N-啉）-羥基磺酸石蠟切片組織CASPASE-10蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

蒿草酚A3-[N-三（羥甲基））-2-羥基磺酸TAPSO石蠟切片組織CASPASE-1蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

苦參D-Cycoloserine D-環(huán)絲氨酸石蠟切片組織CASPASE-2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

苦參KD-Cycoloserine D-環(huán)絲氨酸石蠟切片組織CASPASE-3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
MMVECs細胞核孔蛋白37kda(NUP37)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TIP30 ELISA Kit谷氨酸脫氫酶2抗體

β-骨膠原交聯(lián)(β-CTx)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TIPIN ELISA Kit磷酸化谷氨酸受體1抗體

信號素4C (SEMA4C)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TIMM17A ELISA Kitγ-谷氨酰水解酶抗體

激酶錨定蛋白1(AKAP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TIMM17B ELISA Kit谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶抗體

腺苷酸環(huán)化酶4(ADCY4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FLNC(Filamin-C) ELISA Kit谷氧還蛋白2抗體

心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human TJAP1 ELISA Kit谷氧還蛋白5抗體

血紅蛋白(HB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TIMM22 ELISA Kit谷胱甘肽過氧化酶2抗體