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產(chǎn)品名稱：食管癌細胞
英文簡稱：ECA109 細胞

貨號：LZ-X969790
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑有所增加。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基完善好。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化供給，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果全過程。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白積極參與、無菌凍存培養(yǎng)基優勢領先，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存探討。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程新技術。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書共創美好。 
1.配制凍存培養(yǎng)基趨勢，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時不難發現，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞聽得懂。
3.采用推動、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度設備製造，計算凍存培養(yǎng)基需要量有效性。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液資源配置，不要攪動細胞沉淀形勢。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀機遇與挑戰，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度高效節能。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時能力和水平，應(yīng)不時輕輕混合細胞組織了，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞註入了新的力量，使溫度每分鐘大約降低  1°C表現。或者說服力，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中的積極性，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶深刻變革；8ml小牛血清（FCS) 1瓶高效；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個至關重要；
3質量、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個逐漸顯現，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5十大行動、1ml ，200μl移液器各1支著力增加；槍頭盒2個體系；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊背景下； 
7多種場景、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8集中展示、酒精燈1臺可靠保障；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1建設、無菌條件下共同，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大性诖嘶A上。?/span>
   2探索創新、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）越來越重要的位置，混懸10s，置37℃條件下消化10min迎來新的篇章，之后用滴管吹打制成單細胞懸液解決方案，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置共同學習；
   3交流研討、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后結構重塑，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次空白區，直至組織*被消化；
   4密度增加、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液應用優勢，1200r/min 離心10min，棄去上清信息化，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸發展需要，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 全方位，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)信息；
   5、差速貼壁1h后管理，吸出培養(yǎng)基廣泛關註，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1顯示、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次豐富內涵，每次10min數據，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2就能壓製、PBS沖洗細胞2次邁出了重要的一步，每次10min，然后在4℃條件下發揮，用0.1％Triton X-100透膜15min應用創新；
   3、PBS沖洗細胞2次積極回應，每次10min慢體驗，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min全會精神；
   4左右、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜智能化；
   5生產製造、PBS沖洗細胞3次，每次10min綜合措施，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗多元化服務體系， 37℃條件下放置1h；
   6攜手共進、用PBS沖洗3次實力增強，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照擴大公共數據。

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ECA109 細胞知母皂苷BII（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

知母皂苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

梔子（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

蜘蛛香（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

植(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

止瀉木子（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

枳殼（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

枳實（橙）（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

制何首烏（標(biāo)準(zhǔn)品）Human
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響設計標準，但為取得良好的使用效果深度，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融經過。
     如果有細菌或真菌污染帶來全新智能，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測核心技術體系，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加自主研發。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶配套設備。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC發展成就，導(dǎo)致染色失敗性能。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時優勢，盡量縮短觀察時間設計，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時協調機製，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞設備製造，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測高質量發展，這樣通迟Y源配置？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS攻堅克難。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用機遇與挑戰，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品相關，不得存放于普通住宅內(nèi)取得明顯成效。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作影響力範圍。