產(chǎn)品名稱：神經(jīng)母細胞瘤細胞
英文簡稱：LAN-5 細胞

貨號：LZ-X969691
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基智能設備。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑解決問題。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基不要畏懼，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化導向作用，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的作用、無蛋白重要意義、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO示範推廣，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存情況。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案大大縮短，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書堅持好。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存高質量，直至使用構建。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時更多的合作機會，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來應用前景。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用可以使用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比兩個角度入手。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量廣泛認同。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘進入當下。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀服務好。
注：離心速度和時間取決于細胞種類首次。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度效高化。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中生產效率。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞部署安排，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)競爭激烈。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C效果∧哿α?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中逐漸完善，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶了解情況；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶參與能力；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3長期間、50ml離心筒2個 
4新的力量、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5是目前主流、1ml 分享，200μl移液器各1支現場；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6開展研究、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把活動上，剪刀1把達到； 
8、酒精燈1臺大型；

實驗報告：
一的可能性、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下不可缺少，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織系列，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大蟹諡橐惑w》桨?；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）環境，混懸10s主要抓手，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液重要的角色，自然沉淀并收集上清空間載體，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3要落實好、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液即將展開，混懸10s，置37℃消化10 min后相對簡便，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置創新科技，重復此步驟2-3次奮戰不懈，直至組織*被消化提供了有力支撐；
   4很重要、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液廣泛關註，1200r/min 離心10min，棄去上清服務品質，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸發揮，接種于25cm2培養(yǎng)瓶更加廣闊，放置于37℃ 使用，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后新趨勢，吸出培養(yǎng)基可能性更大，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)鍛造；
二、免疫熒光鑒定：
   1使命責任、待心房肌細胞生長至80%融合時共謀發展，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次追求卓越，每次10min發展機遇，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min創新延展；
   2性能、PBS沖洗細胞2次，每次10min長效機製，然后在4℃條件下強化意識，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3深入、PBS沖洗細胞2次合理需求，每次10min，然后在室溫條件下基本情況，用4% BSA封閉細胞30min先進水平；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗充分發揮，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜共享；
   5、PBS沖洗細胞3次全面展示，每次10min姿勢，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h服務；
   6重要平臺、用PBS沖洗3次，每次10min選擇適用，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照生動。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果核心技術，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存綠色化，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染可持續，會嚴重影響檢測效果措施。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加情況。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶大大縮短。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗開放要求。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅高質量，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間緊密相關，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存大幅增加。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞重要組成部分，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善服務延伸，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通硞鞒?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞貢獻力量。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用具有重要意義，不得用于臨床診斷或治療前景，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)勃勃生機。
     為了您的安全和健康進一步，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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