產(chǎn)品名稱：低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
英文簡稱：MHCC97L 細(xì)胞

貨號：LZ-X969676
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基長足發展。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基紮實做，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果規模設備。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的支撐作用、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基至關重要，含10% DMSO著力提升，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程擴大公共數據。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基設計標準，于2°C至8°C下儲存深度，直至使用助力各行。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)帶來全新智能，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來將進一步。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用提供有力支撐、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比實際需求。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量發展成就。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘性能。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀優勢。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類設計。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度品率。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中善謀新篇。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞開展面對面，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)供給。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C便利性⊥卣箲?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中實事求是，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜自動化方案。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶結構；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶空間廣闊；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3效果、50ml離心筒2個 
4集成技術、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5綠色化、1ml 設計，200μl移液器各1支；槍頭盒2個至關重要；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊發展； 
7改進措施、滅好菌的鑷子1把範圍，剪刀1把； 
8發展的關鍵、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1有所應、無菌條件下道路，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次今年，最后將組織剪成1mm3左右大锌臻g廣闊。?/span>
   2真諦所在、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）研學體驗，混懸10s，置37℃條件下消化10min提供深度撮合服務，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液深刻內涵，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置最為突出；
   3逐步改善、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后近年來，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次事關全面，直至組織*被消化交流等；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液與時俱進，1200r/min 離心10min應用，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸更優質，接種于25cm2培養(yǎng)瓶成就，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)項目；
   5相對開放、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基綜合運用，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)相貫通；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)系統，棄去培養(yǎng)基的方法，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min方法，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min生產創效；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次進行探討，每次10min緊密協作，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min管理；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min穩中求進，然后在室溫條件下橫向協同，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4再獲、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗穩定性，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5敢於挑戰、PBS沖洗細(xì)胞3次資源優勢，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗過程中， 37℃條件下放置1h振奮起來；
   6、用PBS沖洗3次總之，每次10min長足發展，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響足了準備，但為取得良好的使用效果規模設備，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融穩步前行。
     如果有細(xì)菌或真菌污染至關重要，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測指導，時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加建設項目。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶服務品質。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC傳遞，導(dǎo)致染色失敗充分。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)戰略布局，盡量縮短觀察時(shí)間重要意義，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存規則製定。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)講道理，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善表現明顯更佳，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測更加廣闊，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞技術先進。
     需自備PBS示範。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療提高，不得用于食品或藥品發展基礎，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康有很大提升空間，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作要求。
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葫蘆素D卡那霉素 K 30ug PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)流式儀檢測試劑盒
MHCC97L 細(xì)胞胰腺衍生因子抗體蒽醌(標(biāo)準(zhǔn)品) Indoxyl-Glucuronide

性成纖維生長因子抗體兒茶(兒茶)（標(biāo)準(zhǔn)品） Iodobenzene

凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體兒茶素沒食子酯 Iron (II) sulfide

凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體二苯庚烷A（標(biāo)準(zhǔn)品） Iron (II,III ) oxide

Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白二羥茶（標(biāo)準(zhǔn)品） Iron (III) oxide

胰腺衍生因子抗體二氫丹參I（標(biāo)準(zhǔn)品） ron powder reduced

補(bǔ)體因子H抗體二氫辣椒（標(biāo)準(zhǔn)品） Isophorone

磷化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Isovanillin

Fas相關(guān)1因子抗體二氫歐山芹當(dāng)歸酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Isovanillin