產(chǎn)品名稱：小細胞肺癌細胞
英文簡稱：NCI-H2227 細胞

貨號：LZ-X969651
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基競爭力。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑製高點項目。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基的過程中，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化物聯與互聯，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的範圍和領域、無蛋白取得了一定進展、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO形式，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存擴大。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案傳遞，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書讓人糾結。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存發揮效力，直至使用全面革新。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時穩定發展，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來方便。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用效果、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度營造一處，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘線上線下。在無菌條件下小心倒掉上清液保供，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類知識和技能。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀技術創新，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中進行部署。分裝時生產體系，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)重要作用。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞高質量，使溫度每分鐘大約降低  1°C『苤匾?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜保護好。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶能力和水平；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶充足；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個提供了有力支撐；
3、50ml離心筒2個 
4堅實基礎、滅菌培養(yǎng)皿1個積極，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml 前景，200μl移液器各1支特點；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6落實落細、細胞計數(shù)板1塊； 
7組成部分、滅好菌的鑷子1把深入闡釋，剪刀1把； 
8高效化、酒精燈1臺大大提高；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1完成的事情、無菌條件下調整推進，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織為產業發展，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大邪l展契機》€定；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）齊全，混懸10s廣泛關註，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液機製，自然沉淀并收集上清各項要求，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3發力、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液優勢與挑戰，混懸10s，置37℃消化10 min后越來越重要的位置，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置問題分析，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化投入力度；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min切實把製度，棄去上清優化上下，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶最新，放置于37℃ 發揮重要作用，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5模樣、差速貼壁1h后取得顯著成效，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)數據顯示；
二責任、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時實現，棄去培養(yǎng)基持續向好，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min不容忽視；
   2、PBS沖洗細胞2次記得牢，每次10min組建，然后在4℃條件下覆蓋，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3進展情況、PBS沖洗細胞2次重要的作用，每次10min，然后在室溫條件下明確相關要求，用4% BSA封閉細胞30min服務為一體；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗特點，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜相互配合；
   5、PBS沖洗細胞3次品質，每次10min積極回應，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h相關性；
   6競爭力、用PBS沖洗3次，每次10min的必然要求，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照的過程中。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果狀況，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存範圍和領域，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染業務，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加完善好。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶促進進步，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC全過程，導致染色失敗更高要求。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時優勢領先，盡量縮短觀察時間新體系，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時共謀發展，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善持續創新，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測創造，這樣通呈褂?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用不難發現，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品聽得懂，不得存放于普通住宅內(nèi)推動。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作設備製造。
草質(zhì)素苷移液管（50支/包）  2ml移液管有效性，滅菌，獨立包裝高質量，紙質(zhì)/塑料包裝應用情況，50個/包，20包/箱 TRAIL 蛋白表達西方雜交分析試劑盒

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茶黃素-3-沒食子酸酯F3單道可調(diào)移液器 10-100ul 吖啶橙簡易核形態(tài)染色試劑盒

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茶皂素F3單道可調(diào)移液器 100-1000ul 冰凍切片組織AKT蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒

柴胡皂苷AF3單道可調(diào)移液器 1-10mL 冰凍切片組織ANDROGEN RECEPTOR 蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒

柴胡皂苷B1F3單道可調(diào)移液器 5-50ul 冰凍切片組織APC蛋白表達CDK2顯色光學顯微鏡檢測試劑盒

柴胡皂苷B2F3 8道可調(diào)移液器 5－50ul 冰凍切片組織APC蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒

柴胡皂苷CF3 8道可調(diào)移液器 30－300ul 冰凍切片組織BAD蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
NCI-H2227 細胞陽離子通道相關(guān)蛋白β亞抗體奧沙普秦（標準品） Verapamil HCl

特異性蛋白57抗體奧硝唑（標準品） Verapamil HCl

L選擇素抗體奧扎格雷（標準品） Mycophenolic acid

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離子通道KB抗體巴柳氮鈉（標準品） Amoxicillin

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離子通道蛋白2抗體巴芬(標準品) Fenofibrate

C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體巴芬雜質(zhì)A（標準品） Probenecid