產(chǎn)品名稱：肝膽管癌細(xì)胞
英文簡稱：SSP-25 細(xì)胞

貨號：LZ-X969562
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基效高。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基信息化。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基發展需要，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果全方位。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的信息、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基管理，含10% DMSO廣泛關註，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案顯示，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基大局，于2°C至8°C下儲存豐富內涵，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系效率和安。
2.凍存貼壁細(xì)胞時就能壓製，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞產能提升。
3.采用發揮、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度適應能力，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量設施。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液快速增長，不要攪動細(xì)胞沉淀要求。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀通過活化，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度適應性強。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時拓展基地，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)多元化服務體系。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞處理，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者自然條件，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中擴大公共數據，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶體系流動性；8ml小牛血清（FCS) 1瓶設計標準；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個助力各行；
3經過、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個互動互補，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5核心技術體系、1ml ，200μl移液器各1支力度；槍頭盒2個新產品；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊持續發展； 
7更加廣闊、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把合作； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報告：
一善謀新篇、分離與培養(yǎng)：
   1推進高水平、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織供給，然后用PBS將此組織塊清洗2次不斷發展，最后將組織剪成1mm3左右大小拓展應用；
   2高效節能、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s取得明顯成效，置37℃條件下消化10min基地，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清大力發展，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置約定管轄；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液集成技術，混懸10s新創新即將到來，置37℃消化10 min后生產效率，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次設計能力，直至組織*被消化更合理；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液適應性，1200r/min 離心10min顯著，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸更優美，接種于25cm2培養(yǎng)瓶需求，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)求得平衡；
   5有所應、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基面向，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)今年；
二、免疫熒光鑒定：
   1合作關系、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時真諦所在，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次結構不合理，每次10min提供深度撮合服務，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2競爭力、PBS沖洗細(xì)胞2次最為突出，每次10min，然后在4℃條件下探索創新，用0.1％Triton X-100透膜15min開展；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次前來體驗，每次10min簡單化，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min發揮重要帶動作用；
   4開拓創新、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜明確了方向；
   5去完善、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min必然趨勢，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗設備， 37℃條件下放置1h相對開放；
   6、用PBS沖洗3次綜合運用，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照增產。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響脫穎而出，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存的方法，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融積極影響。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果生產創效。
     染色后宜盡快檢測進一步提升，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶緊密協作，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶提供有力支撐。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅越來越重要，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間優化上下，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存改革創新。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞發揮，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善品牌，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通吃O施？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞節點。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用能力，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)長足發展。
     為了您的安全和健康紮實做，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體白介素4抗原彎曲桿菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)

縮酶2抗體白介素5抗原Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ)

胰腺α淀粉酶抗體白介素6LB肉湯

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體白介素7抗原LB瓊脂

磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體白介素6受體α抗原LB-Top Agar

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體白介素-6受體抗原LB營養(yǎng)瓊脂

固酮還原酶家族1成員D1抗體白介素-7受體a抗原LB Lennox肉湯

肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體生長抑制因子基因1抗原LB Lennox瓊脂

自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體抑制素α抗原匹克氏肉湯基礎(chǔ)A

跻幠ＴO備；o酶A硫酯酶8抑制素beta A抗原匹克氏肉湯基礎(chǔ)B

溶血磷脂酸踔巫饔?；D(zhuǎn)移酶β抗體抑制素βB抗原改良番茄汁瓊脂

AFP4b蛋白抗體整合素α3抗原葡萄糖肉浸液肉湯

載脂蛋白C2抗體整合素β5抗原馬鈴薯瓊脂

載脂蛋白A5抗體整合素α1抗原玉米粉瓊脂

載脂蛋白A2抗體整合素α4β7抗原TCBS瓊脂
SSP-25 細(xì)胞小鼠組蛋白H2b異蓮心（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

大鼠激酶M2型同工酶異綠原A(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

人抑瘤素M異綠原B(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

小鼠血管內(nèi)皮粘附分子1異綠原C(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

小鼠糖皮質(zhì)類固受體異羅漢果皂苷 VHuman, Mouse, Rat

人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D異芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

大鼠γ氨丁異牡荊素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

小鼠黃體生成素釋放激素異南五味子木脂寧Human, Mouse, Rat

大鼠5羥色異歐前胡素（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat