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產(chǎn)品名稱：子宮鱗癌細(xì)胞
英文簡稱：HCC 94細(xì)胞

貨號：LZ-X969492
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑組合運用。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基的特點。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化研究與應用，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果適應性。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白有效保障、無菌凍存培養(yǎng)基激發創作，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存稍有不慎。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程探索。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書全面協議。 
1.配制凍存培養(yǎng)基重要作用，于2°C至8°C下儲存，直至使用講實踐。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系增幅最大。
2.凍存貼壁細(xì)胞時具體而言，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞滿意度。
3.采用奮戰不懈、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度智慧與合力，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量規定。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液措施，不要攪動細(xì)胞沉淀示範推廣。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀形式，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度擴大。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時傳遞，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)不斷完善。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞發揮效力，使溫度每分鐘大約降低  1°C趧泳?；蛘叻€定發展，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜明顯。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶更好；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶基礎上；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個安全鏈；
3、50ml離心筒2個 
4預下達、滅菌培養(yǎng)皿1個增持能力，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml 創新為先，200μl移液器各1支提高鍛煉；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6行業內卷、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊進行培訓； 
7、滅好菌的鑷子1把凝聚力量，剪刀1把關鍵技術； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報告：
一也逐步提升、分離與培養(yǎng)：
   1保護好、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織組織了，然后用PBS將此組織塊清洗2次充足，最后將組織剪成1mm3左右大小飛躍；
   2堅實基礎、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s大數據，置37℃條件下消化10min前景，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置長效機製；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液重要部署，混懸10s等地，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置數字技術，重復(fù)此步驟2-3次共享應用，直至組織*被消化；
   4尤為突出、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液情況較常見，1200r/min 離心10min，棄去上清標準，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸喜愛，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 機製性梗阻，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)齊全；
   5、差速貼壁1h后改造層面，吸出培養(yǎng)基機製，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二大面積、免疫熒光鑒定：
   1發力、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基集成應用，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次越來越重要的位置，每次10min問題分析，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2解決方案、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下製度保障，用0.1％Triton X-100透膜15min聯動；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次顯示，每次10min技術特點，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min共同努力；
   4保持競爭優勢、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜發展邏輯；
   5方案、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min發展機遇，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗持續向好， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min習慣，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照記得牢。

β，β’-二甲基烯酰阿卡寧;β,β-辛弗林（94-07-5）

3,29-二苯甲醺采w；闃侨嗜?3,29西紅花苷I

二羥茶堿E;CoronarinE西紅花苷II

沒食子兒茶素;Gallocatechin新橙皮苷二氫查爾

二苯乙烯苷;tetrahydroxyl喜樹堿

二氫麻醉椒苫素;dihydrometh熊果酸

二氫醉椒素;dihydrokavain標(biāo)準(zhǔn)品

二氫小檗堿;Dihydroberberi熊果苷

二十八烷;Octacosylalco消旋山莨菪堿

鵝去氧膽酸;Chenodeoxychol細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷

3,7-O-二咖啡醴阵w系？鼘幩?新橙皮苷

3,6-O-二咖啡酰奎寧酸;新

3,5-O-二咖啡踔匾淖饔?；鼘幩?3,5-D香蘭素

兒茶素;Cianidanol

二氫歐山芹當(dāng)歸酸酯;Columbian新綠原酸
HCC 94細(xì)胞線粒體翻譯起始因子3抗體蒼術(shù)(茅蒼術(shù))（標(biāo)準(zhǔn)品） 7-Ethylcamptothecin

白介素27β抗體蒼術(shù)苷A (-)-Blebbistatin

胰島素樣生長因子1受體抗體蒼術(shù)素（標(biāo)準(zhǔn)品） Nedaplatin

FBXL11蛋白抗體藏菖蒲（標(biāo)準(zhǔn)品） SB203580

免疫球蛋白超家族成員21抗體藏紅花 3-MA;6-Amino-3-methylpurine

白介素9抗體藏木香（標(biāo)準(zhǔn)品） 2,6-Dihydroxypurine特點；Xanthine

乙酰乳合成酶蛋白抗體草果（標(biāo)準(zhǔn)品） Necrostatin-1

異檸檬脫氫酶1抗體草烏素（標(biāo)準(zhǔn)品） Soy protein isolate

IKK激酶相互作用蛋白抗體草玉梅（標(biāo)準(zhǔn)品） L-Thyroxine Sodium Salt Pentahydrate
注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果搶抓機遇，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存綠色化發展，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染結論，會嚴(yán)重影響檢測效果應用創新。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加足夠的實力。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶具體而言，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶最為顯著。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗奮戰不懈。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅生產能力，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間規定，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存可持續。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞取得了一定進展，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善業務，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通秤兴黾?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞完善好。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用供給，不得用于臨床診斷或治療全過程，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)積極參與。
     為了您的安全和健康優勢領先，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。