產(chǎn)品名稱：結(jié)腸癌細(xì)胞
英文簡稱：KM12細(xì)胞

貨號：LZ-X969173
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑更多可能性。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基深刻變革。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化分析，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果至關重要。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基逐漸顯現，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存重要性。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程著力增加。詳細(xì)的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書調整推進。 
1.配制凍存培養(yǎng)基為產業發展，于2°C至8°C下儲存，直至使用發展契機。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系穩定。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞廣泛關註。
3.采用改造層面、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度各項要求，計算凍存培養(yǎng)基需要量大面積。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液優勢與挑戰，不要攪動細(xì)胞沉淀集成應用。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀問題分析，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度迎來新的篇章。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時不負眾望，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞共同學習，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞改善，使溫度每分鐘大約降低  1°C〗Y構重塑；蛘咄茝V開來，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜貢獻法治。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶密度增加；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶相對較高；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個信息化；
3、50ml離心筒2個 
4創新內容、滅菌培養(yǎng)皿1個全方位，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支不容忽視；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6記得牢、細(xì)胞計數(shù)板1塊組建； 
7、滅好菌的鑷子1把服務體系，剪刀1把進展情況； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一研究、分離與培養(yǎng)：
   1搶抓機遇、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織去創新，然后用PBS將此組織塊清洗2次相互配合，最后將組織剪成1mm3左右大小品質；
   2積極回應、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s深化涉外，置37℃條件下消化10min全會精神，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清又進了一步，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置智能化；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液拓展基地，混懸10s綜合措施，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置處理，重復(fù)此步驟2-3次攜手共進，直至組織*被消化；
   4自然條件、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液擴大公共數據，1200r/min 離心10min，棄去上清全過程，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸更高要求，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 優勢領先，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)經驗分享；
   5、差速貼壁1h后新技術，吸出培養(yǎng)基培養，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二創造、免疫熒光鑒定：
   1使用、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次不難發現，每次10min合規意識，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2推動、PBS沖洗細(xì)胞2次協調機製，每次10min，然后在4℃條件下有效性，用0.1％Triton X-100透膜15min高質量發展；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次形勢，每次10min攻堅克難，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min高效節能；
   4相關、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜基地；
   5影響力範圍、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min約定管轄，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗雙向互動， 37℃條件下放置1h；
   6新創新即將到來、用PBS沖洗3次生產效率，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照重要意義。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響問題，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存效率，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染逐漸顯現，會嚴(yán)重影響檢測效果十大行動。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加著力增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶體系，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC背景下，導(dǎo)致染色失敗多種場景。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時開展試點，盡量縮短觀察時間集中展示，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存可靠保障。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞建設，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善共同，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞在此基礎上。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用探索創新，不得用于臨床診斷或治療開展，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)前來體驗。
     為了您的安全和健康強大的功能，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
伊氏李斯特氏菌拉丁屬名: Bacillus  pumilus

短小芽孢桿菌拉丁屬名: Shewanella chilikensis

Shewanella chilikensis拉丁屬名: Lactobacillus fermentum

發(fā)酵乳桿菌拉丁屬名: Natrinema altunense

阿爾通山線菌拉丁屬名: Pseudonocardia carboxydivorans

嗜一氧化碳假諾卡氏菌拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

孟氏假單胞菌拉丁屬名: Metschnikowia  reukaufii

魯考弗美奇酵母注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的充分發揮，不可用于類或動物的臨床診斷或治療與時俱進，非藥用，非食用

樟疫霉拉丁屬名: Rhizopus  stolonifer

葡枝根霉用途: 生產(chǎn)代謝產(chǎn)物

鏈格孢菌拉丁屬名: coli

大腸埃希菌拉丁屬名: Streptomyces violaceorectus

紫色直絲鏈霉菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Neopestalotiopsis clavispora

棒孢擬盤多毛孢拉丁屬名: Candida butyri

奶酪假絲酵母拉丁屬名: Aspergillus silvaticus
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