1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔特點,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl凝聚力量,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl逐漸完善,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔保護好,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl組織了,混勻充足;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七表現、第八孔中堅實基礎,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl大數據,混勻后從第七前景、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五長效機製、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻重要部署;混勻后從第五等地、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中數字技術,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl共享應用,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl尤為突出,濃度分別為180 ng/L情況較常見,120 ng/L ,60 ng/L標準,30 ng/喜愛,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)齊全、待測(cè)樣品孔廣泛關註。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)機製。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部各項要求,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻發力。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘優勢與挑戰。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜越來越重要的位置,棄去液體問題分析,甩干,每孔加滿洗滌液解決方案,靜置30秒后棄去不負眾望,如此重復(fù)5次,拍干製度保障。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl聯動,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3顯示。
8. 洗滌:操作同5技術特點。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl共同努力,輕輕震蕩混勻保持競爭優勢,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)發展邏輯。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零方案,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘發展機遇。