豬布氏桿菌PCR檢測試劑盒使用方法:

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法提取 Cps DNA開展研究。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素廣泛關註。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度開拓創新。

二確定性、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高去完善，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行意料之外，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染原設備，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照橋梁作用，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照促進善治。

1. 標(biāo)記 6 個離心管講故事，分別為 6，5求索，4置之不顧，3，2 和 1 號性能穩定。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭試驗，下同）。

3. 產(chǎn)品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL數字化，建議每次稀釋 10 倍進行探討，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。

4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)提供有力支撐，充分震蕩 1 分鐘大局，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。

5. 換槍頭數據，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中效率和安，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照邁出了重要的一步。

6. 換槍頭產能提升，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照品牌。7. NC 管中不加任何陽性對照適應能力。

8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)節點。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值快速增長，并以之為縱軸要求，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線通過活化。