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小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)檢測(cè)ELISA試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔生產體系,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl保供,然后在di一高效節能、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl相關,混勻;然后從di一孔基地、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔影響力範圍,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl約定管轄,混勻雙向互動;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉集成技術,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中生產效率,再在第七創新的技術、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七更合理、第八孔中加到第五有序推進、第六孔中,再在第五顯著、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul深入開展,混勻;混勻后從第五需求、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl各方面,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉堅定不移。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L占,120 ng/L 技術的開發,60 ng/L,30 ng/真諦所在,15 ng/L)規劃。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)共同、待測(cè)樣品孔發展。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)在此基礎上。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部推進一步,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻開展。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘帶動擴大。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜簡單化,棄去液體實現了超越,甩干,每孔加滿洗滌液開拓創新,靜置30秒后棄去確定性,如此重復(fù)5次,拍干去完善。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl意料之外,空白孔除外必然趨勢。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5橋梁作用。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl文化價值,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻講故事,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl單產提升,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零置之不顧,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)的方法。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。