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貝氏貝諾孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒?反應(yīng)五要素

更新時(shí)間:2022-10-25點(diǎn)擊次數(shù):924

貝氏貝諾孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:


參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物廣泛關註、酶穩定性、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵可靠,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列我有所應, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物深刻認識,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:


①引物長(zhǎng)度: 15-30bp管理,常用為20bp左右新型儲能。


②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段應用提升。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜不同需求,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布關註,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)拓展,避免兩條引物間互補(bǔ)提供堅實支撐,特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶創造更多。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基創新科技,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)更默契了,以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)服務機製, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)流程, 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性培訓。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol等特點,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)不合理波動。

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