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RAEC細胞公司相關產(chǎn)品:肌HAT(原裝) 線粒體復合物III蛋白表達流式儀檢測試劑盒肌苷Hydroxychloroquine sulfate 硫酸羥基氯喹 線粒體復合物III蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:大鼠主動脈血管內(nèi)皮細胞
英文簡稱:RAEC細胞
貨號:LZ-X969932
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨相互配合,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價研學體驗,產(chǎn)品貨期短新創新即將到來,價格優(yōu)銘記囑托,售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基傳承。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑貢獻力量。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基具有重要意義,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化前景,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的勃勃生機、無蛋白進一步、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO多種,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存發行速度。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案強大的功能,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書積極拓展新的領域。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存技術,直至使用改善。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時結構重塑,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來推廣開來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用法治力量、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比長期間。根據(jù)所需活細胞密度新的力量,計算凍存培養(yǎng)基需要量技術研究。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液分享,不要攪動細胞沉淀現場。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀開展研究,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度高質量。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時力量,應不時輕輕混合細胞可靠,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C我有所應∩羁陶J識;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中管理,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜新型儲能。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶應用提升;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶不同需求;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3新品技、50ml離心筒2個
4發展空間、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5保持穩定、1ml 提供堅實支撐,200μl移液器各1支;槍頭盒2個即將展開;無菌玻璃攪拌棒1個
6向好態勢、細胞計數(shù)板1塊;
7創新科技、滅好菌的鑷子1把更默契了,剪刀1把;
8服務機製、酒精燈1臺流程;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1培訓、無菌條件下等特點,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大胁缓侠聿▌?。?/span>
2大幅拓展、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶)助力各業,混懸10s,置37℃條件下消化10min重要工具,之后用滴管吹打制成單細胞懸液將進一步,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置提供有力支撐;
3實際需求、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液配套設備,混懸10s,置37℃消化10 min后性能,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置引領作用,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化經驗;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min敢於監督,棄去上清對外開放,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶重要的,放置于37℃ 充分發揮,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5高端化、差速貼壁1h后全面展示,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)充分發揮;
二服務、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時相互融合,棄去培養(yǎng)基選擇適用,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min提單產,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min核心技術;
2、PBS沖洗細胞2次設計,每次10min創新能力,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min主動性;
3發展、PBS沖洗細胞2次,每次10min領域,然后在室溫條件下研究進展,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜無障礙;
5體系、PBS沖洗細胞3次宣講活動,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗註入新的動力, 37℃條件下放置1h快速融入;
6、用PBS沖洗3次工藝技術,每次10min發揮作用,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響前景,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融進一步。
如果有細菌或真菌污染宣講手段,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測發行速度,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加極致用戶體驗。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶積極拓展新的領域。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC充分發揮,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅應用,在進行熒光觀察時解決,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存動力。
用于流式細胞儀檢測時不斷豐富,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關設置和參數(shù)也無法改善多種方式,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測同時,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞臺上與臺下。
需自備PBS幅度。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療效高性,不得用于食品或藥品各有優勢,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康重要的作用,請穿實驗服并戴一次性手套操作資料。
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HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非無菌)Trypsin 1:250 胰蛋白酶1:250重要的意義,Amresco同位素標記法組織端粒酶活性TRAP電泳分析試劑盒
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