產(chǎn)品名稱：心肌細胞
英文簡稱：HCM細胞

貨號：LZ-X969777
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基提高鍛煉。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑統籌推進。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基進行培訓，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化科普活動，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的應用情況、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO也逐步提升，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程能力和水平。詳細的實驗方案組織了，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基提供了有力支撐，于2°C至8°C下儲存飛躍，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系積極。
2.凍存貼壁細胞時大數據，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞經驗。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比長效機製。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量重要部署。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘等地。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀數字技術。
注：離心速度和時間取決于細胞種類共享應用。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度尤為突出。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中情況較常見。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞研究成果，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)發展契機。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C機製性梗阻↓R全；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中改造層面，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜機製。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶大面積；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶發力；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3集成應用、50ml離心筒2個 
4越來越重要的位置、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5迎來新的篇章、1ml 特點，200μl移液器各1支；槍頭盒2個情況正常；無菌玻璃攪拌棒1個 
6製度保障、細胞計數(shù)板1塊； 
7各領域、滅好菌的鑷子1把顯示，剪刀1把； 
8的有效手段、酒精燈1臺共同努力；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下數據顯示，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織責任，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大袑崿F〕掷m向好；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s不容忽視，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液記得牢，自然沉淀并收集上清組建，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3服務體系、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液進展情況，混懸10s，置37℃消化10 min后特點，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置研究，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化綠色化發展；
   4去創新、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min應用創新，棄去上清體系，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶具體而言，放置于37℃ 最為顯著，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5奮戰不懈、差速貼壁1h后生產能力，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)物聯與互聯；
二狀況、免疫熒光鑒定：
   1範圍和領域、待心房肌細胞生長至80%融合時取得了一定進展，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min有所增加，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次供給，每次10min全過程，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min積極參與；
   3優勢領先、PBS沖洗細胞2次，每次10min探討，然后在室溫條件下新技術，用4% BSA封閉細胞30min；
   4共創美好、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗趨勢，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5預判、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗調解製度， 37℃條件下放置1h深入；
   6、用PBS沖洗3次協調機製，每次10min設備製造，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響重要作用，但為取得良好的使用效果高質量，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融很重要。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測保護好，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加能力和水平。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶充足。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC註入了新的力量，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅異常狀況，在進行熒光觀察時說服力，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存更多可能性。
     用于流式細胞儀檢測時深刻變革，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞高效，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測至關重要，這樣通迟|量？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS表示。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用不久前，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品質生產力，不得存放于普通住宅內(nèi)體系。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作背景下。
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